Razvoj molekularnih orodij in metod za genetsko spreminjanje kvasovke Hanseniaspora uvarumŠkrinjar, David (Avtor) Čadež, Neža (Mentor) Kranjc, Luka (Komentor) molekularna orodjagenetsko spreminjanjeHanseniaspora uvarumnekonvencionalne kvasovkeSaccharomyces cerevisiaeRazvoj molekularnih orodij in metod genskega inženiringa ima ključno vlogo pri razvoju novih gostiteljskih organizmov in njihovem prenosu v biotehnološke procese. Do sedaj sta bila industrijsko najpomembnejša mikrobna gostitelja bakterija Escherichia coli ter kvasovka Saccharomyces cerevisiae, vendar se vedno več pozornosti posveča tudi uporabi nekonvencionalnih vrst kvasovk. V sklopu naloge smo se posvetili vrsti Hanseniaspora uvarum, ki jo najpogosteje najdemo na grozdnih jagodah in ima pomembno vlogo pri fermentaciji mošta in posledično lahko vpliva na kakovost vina. V naši raziskavi smo v kvasovki S. cerevisiae sestavili dva plazmida, ki sta vsebovala 700-1000 bp dolgi regiji, homologni ribosomalni RNA oziroma transpozona Ty3. To je omogočilo integracijo genske kasete v genom H. uvarum, katera je vsebovala selekcijski označevalec za odpornost proti higromicinu, ter zapis za zeleni fluorescenčni protein. Vsebovala je tudi elemente, ki omogočajo pomnoževanje plazmida tako v kvasovki S. cerevisiae, kot v bakteriji E. coli. Pripravljeni plazmid smo vnesli v H. uvarum z kombinirano metodo transformacije z uporabo litijevega acetata in elektroporacije, kjer se je genska kaseta preko homologne rekombinacije integrirala v genom. Ker je bila učinkovitost transformacije H. uvarum zelo nizka, smo metodo transformacije poskusili izboljšati, vendar nam to ni uspelo. Kljub temu smo uspeli s homologno rekombinacijo vstaviti in izraziti gen za zeleni fluorescenčni protein v genomu H. uvarum. To bi v prihodnosti lahko pripomoglo k označevanju sevov ter spremljanju celične lokalizacije oziroma rasti H. uvarum v ko-kulturah.[D. Škrinjar]20252025-06-07 07:16:38Magistrsko delo/naloga169741UDK: 579.25:577.2.088VisID: 257552COBISS_ID: 239320323sl