Biosinteza termostabilne serinske proteinaze iz arhej v bakteriji Bacillus subtilisKockar, Saša (Avtor) Poklar Ulrih, Nataša (Mentor) Bahun, Miha (Komentor) Bacillus subtilispernizinpromotorproteinazaproteolitična aktivnostrekombinantni proteinrekombinantno izražanjetermostabilnostPernizin je subtilizinu podobna serinska proteinaza iz hipertermofilne arheje Aeropyrum pernix K1. Zaradi izjemne temperaturne stabilnosti in zmožnosti razgradnje infektivnih prionskih proteinov, ima pernizin visok potencial za industrijske aplikacije. Praktično uporabo pernizina omejuje nizek donos te proteinaze v izvornem organizmu, kjer je manjši od 0,1 mg na liter kulture. Bakterije B. subtilis so primeren gostiteljski organizem za proizvodnjo rekombinantnih proteinov zaradi poznanih močnih promotorjev in zmožnosti učinkovitega izločanja proteinov iz celic, torej bi lahko predstavljale obetaven ekspresijski sistem za proizvodnjo pernizina. Bakterije B. subtilis naravno proizvajajo proteinazo subtilizin, ki je homologna pernizinu, v količinah do 1 g na liter kulture. V magistrski nalogi smo preverili zmožnost biosinteze rekombinantnega pernizina z bakterijami B. subtilis. Pri tem smo primerjali tri različne promotorje (PaprE, Pveg in Pylb) za nadzor izražanja pernizina. Izmed preizkušenih promotorjev se je kot najustreznejši izkazal Pylb, saj smo z uporabo tega promotorja v gojišču zaznali okoli 40 % višjo aktivnost pernizina v primerjavi s promotorjema PaprE ter Pveg. Proizvedeni rekombinantni pernizin smo tudi izolirali iz gojišča ter ovrednotili njegovo aktivnost in stabilnost. S CD-spektrometrijo in fluorescenčno emisijsko spektrometrijo smo potrdili, da izoliran rekombinantni pernizin ohrani podobno visoko temperaturno stabilnost in aktivnost kot rekombinantni pernizin, proizveden v bakterijah Escherichia coli.20252025-02-14 07:15:33Magistrsko delo/naloga167299VisID: 256052COBISS_ID: 226126851sl