​Vpliv aktivacijskih domen Tollu podobnih receptorjev na imunoterapevtsko učinkovitost limfocitov T z izraženimi himernimi antigenskimi receptorjiMikolič, Veronika (Avtor) Sever , Matjaž (Mentor) Lainšček, Duško (Komentor) Celična terapija CAR Timunoterapija rakaTLRV boju proti rakavim obolenjem postajajo vse bolj razširjeni imunoterapevtski pristopi. Eden izmed tovrstnih pristopov je terapija s celicami T, ki na svoji površini izražajo himerne antigenske receptorje (CAR). CAR so sintetični receptorji, sestavljeni iz več molekularnih komponent, ki so običajno pridobljene iz različnih elementov imunskega sistema. Terapija s celicami CAR T se je izkazala za učinkovito pri zdravljenju nekaterih hematoloških malignih obolenj, kar je privedlo do odobritve več celičnih produktov za klinično uporabo pri bolnikih, ki so neodzivni na druge oblike zdravljenja ali pri katerih se bolezen ponovi. Širšo uporabo celične terapije CAR T omejujejo resni neželeni učinki in drugi izzivi, povezani s terapijo. Za izboljšanje in optimizacijo terapije s celicami CAR T se proučujejo različne možnosti izboljšav konstrukta CAR in njegovih domen. V doktorskem delu smo pripravili in testirali nove konstrukte CAR, ki vključujejo kostimulacijske domene prirojenega imunskega sistema iz signalne poti Tollu podobnih receptorjev (TLR). Osnovna zasnova našega raziskovalnega dela je bil receptor CAR, usmerjen proti antigenu CD19, s kostimulacijsko domeno 4-1BB in aktivacijsko domeno CD3?. Na podlagi začetnih presejalnih poskusov smo za nadaljnje poskuse izbrali receptor CAR s skrajšano kostimulacijsko domeno TLR4, CAR s proteinom primarnega odziva mieloidne diferenciacije (MyD88) in CAR s skrajšanim adapterjem, ki vsebuje domeno Toll/IL-1 in inducira interferon-ß (TRIF). Celice CAR T smo pripravili z lentivirusno transdukcijo in ob kokultivaciji s CD19 pozitivnimi hematološkimi malignimi celicami ter celicami čvrstega tumorja opazili izrazito povečano aktivacijo celic na podlagi sproščanja citokina IL-2. Pri nekaterih izbranih zasnovah CAR T smo zasledili tudi izboljšano citotoksičnost in povečano sproščanje IFN-?. V raziskovalnem delu nismo zaznali nespecifičnega sproščanja citokinov, kar nakazuje odsotnost izdatnejšega toničnega signaliziranja. Z analizo celičnih imunoloških označevalcev ob odsotnosti antigena nismo ugotovili izrazitih fenotipskih razlik med različnimi celicami CAR T. Rezultati analize sekvenciranja RNA so nam pokazali povečano izražanje določenih genov, ki sodelujejo v prirojenem imunskem odzivu, aktivaciji in proliferaciji celic T. V poskusih na ksenograftnem mišjem modelu s čvrstimi tumorji so celice CAR T z MyD88 in TLR4 izkazale podaljšano obdobje remisije v primerjavi z osnovno zasnovo CAR. Na drugi strani so poskusi s CAR TRIF pokazali slabšo učinkovitost in lastnosti, ki bi lahko omejile njegovo delovanje. V doktorskem delu smo pokazali, da imajo lahko aktivacijske domene TLR potencial za uporabo v celični terapiji CAR T, in hkrati poudarili, da lahko vključitev nekaterih signalnih poti zmanjša dolgoročno učinkovitost celic CAR T.20242024-10-21 12:28:39Doktorsko delo/naloga164305VisID: 28575sl