Spremljanje preoblikovanja citoskeleta glioblastomskih celic v prisotnosti nanoteles usmerjenih proti transmembranskemu proteinu FREM2Kladnik, Špela (Avtor) Jovčevska, Ivana (Mentor) glioblastomFREM2migracijainvazijapreoblikovanje citoskeletavimentinaktinGlioblastomi so gliomi IV. stopnje in so najpogostejša oblika primarnih malignih tumorjev centralnega živčnega sistema. Danes je to še vedno bolezen s slabo prognozo, saj živijo pacienti v povprečju le 15 mesecev po diagnozi. Standardno zdravljenje obsega kirurško odstranitev tumorja, ki ji sledi kemoterapija s temozolomidom (TMZ). V večini primerov pride do ponovnega pojava tumorja, zaradi česar pacienti običajno podležejo bolezni v manj kot enem letu. Zato je ta oblika raka še vedno ena izmed najbolj smrtonosnih. Zaradi agresivne in invazivne narave glioblastoma ter visoke smrtnosti je bolezen čedalje pogostejša izbira za iskanje novih tarč, ki bi omogočile zdravljenje in izboljšale možnost preživetja. V magistrskem delu smo raziskovali povezavo med proteinom FREM2 in preoblikovanjem celičnega citoskeleta ter vplivom na celično migracijo in invazijo. Transmembranski protein FREM2 (angl. FRAS1-related extracellular matrix protein 2) je prisoten v glioblastomskih celicah in ima pomembno vlogo pri gibljivosti celic. Za delo smo uporabljali komercialno dostopne glioblastomske celične linije U87MG in U251MG. Vpliv proteina FREM2 na preoblikovanje celičnega citoskeleta in na celično migracijo ter invazijo smo preučevali z dvema metodama: 1) utišanje gena FREM2 s siRNA, in 2) tretiranje z nanotelesi, usmerjenimi proti proteinu FREM2. Opazovali smo celično migracijo pri utišanih oziroma tretiranih in kontrolnih celičnih linijah, natančneje, če utišanje proteina FREM2 vpliva na hitrost celične migracije in invazije. Izvedli smo tudi tretiranje z nanotelesi NB3F18, specifičnimi za protein FREM2. Ob vezavi nanoteles se spremeni konformacija proteina in s tem tudi njegova funkcija. Z imunofluorescenčno mikroskopijo smo opazovali 3 različne komponente citoskeleta: vimentin, β-aktin in F-aktin. Želeli smo testirati, če tretiranje celic z nanotelesi enako vpliva na organizacijo citoskeleta kot utišanje gena FREM2 s siRNA. Pri vimentinu opazne razlike ni bilo, smo pa predvidevali, da je vpliv na aktinski citoskelet večji in bi razlike opazili tam. Ker smo imeli pri eksperimentih z β-aktinom in F-aktinom kar nekaj težav, preoblikovanja aktinskega citoskeleta nismo dokazali in bi bile potrebne še nadaljnje optimizacije in raziskave.20242024-10-02 12:35:01Magistrsko delo/naloga163134VisID: 22815COBISS_ID: 217844483sl