Proizvodnja karotenoidov z bakterijo Streptomyces rimosusDremelj, Sebastjan (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) Avbelj, Martina (Komentor) Streptomyces rimosuskarotenoidiβ-karotenizorenieratenmevalonatna potKarotenoidi so obarvane spojine, ki jih proizvajajo rastline in mikroorganizmi. Zanimiv za uporabo je predvsem β-karoten, ki ima pozitivne učinke na zdravje ljudi, prav tako se ga uporablja v živilski ter farmacevtski industriji. Več kot 90 % β-karotena se proizvede s kemijsko sintezo, zato je kot alternativa zanimiva biosinteza z uporabo gostiteljskih mikroorganizmov. V magistrskem delu smo kot gostiteljski organizem za heterologno izražanje karotenoidov uporabili bakterijo Streptomyces rimosus, katera ne sintetizira gradbene enote izopentenil difosfata in dimetilalil difosfata po mevalonatni poti, prav tako je biosintezna genska gruča za izorenieraten pri normalnih pogojih gojenja slabo izražena. Pri tem smo uporabili predhodno pripravljene plazmidne konstrukte z različnimi zapisi crt genov (crtE, crtI, crtB, crtY, crtV, crtU), ki kodirajo biosintezo izorenieratena. S pomočjo postopka konjugacije smo plazmidne konstrukte vnesli v seva S. rimosus ATCC 10970 ∆145 ∆OTC in S. rimosus ATCC 10970. Izbrane transformante sevov smo gojili v vegetativnem gojišču GOTC in nato prenesli v produkcijsko gojišče SM. Tekom eksperimentalnega dela smo izvedli optimizacijo postopka ekstrakcije katorenoidov. Z uporabo metode LC-MS/MS smo identificirali β-karoten in prisotnost spojine izorenieratena. Demonstrirali smo, da sta seva S. rimosus ATCC 10970 in S. rimosus ATCC 10970 ∆145 ∆OTC sposobna sintetizirati β-karoten s heterolognim izražanjem genske skupine crt. Ugotovili smo, da je za produkcijo β-karotena bolj primeren sev S. rimosus ATCC 10970, saj smo pri vzorcih S. rimosus ATCC 10970 s kromosomsko integriranim plazmidom pAB04ErmE_EIBVY MEVC detektirali najvišje koncentracije β-karotena.20242024-10-02 07:16:16Magistrsko delo/naloga163065VisID: 248102COBISS_ID: 210691075sl