Optimizacija in verifikacija metod prvega in drugega nivoja presejalnega testiranja novorojencev za cistično fibrozo iz vzorcev posušenega krvnega madežaZaložnik, Neža (Avtor) Trebušak Podkrajšek, Katarina (Mentor) Repič Lampret, Barbka (Komentor) cistična fibrozapresejalno testiranje novorojencevimunoreaktivni tripsinogens pankreatitisom povezan proteinverifikacija metodeCistična fibroza je avtosomno-recesivna dedna bolezen, ki se najpogosteje pojavi pri kavkazijski populaciji in se izrazi pri približno 1:3500 živorojenih otrok. Bolezen se razvije pri otrocih, ki nosijo dve patološki genetski spremembi v področju gena CFTR na kromosomu 7 in prizadene številne organe kot so pljuča, trebušna slinavka, prebavila, jetra in reproduktivni sistem, posledica česar je krajša življenjska doba bolnikov. Namen magistrske naloge je bil vpeljati in verificirati metodi, ki se bosta uporabljali v okviru nacionalnega programa presejanja novorojencev v Sloveniji za cistično fibrozo na prvem (merjenje imunoreaktivnega tripsinogena – IRT) in drugem nivoju (merjenje s pankreatitisom povezanega proteina – PAP). V ta namen smo po modelu 5 x 5 za metodi DELFIA® Neonatal IRT in MucoPAP-F določili natančnost (znotraj in med serijami) in pravilnost. Pri določanju natančnosti metode DELFIA® Neonatal IRT smo izračunali koeficiente variacij za 3 kontrolne vzorce, ki so se znotraj serije gibali med 4,6 % in 5,8 %, med serijami pa med 1,9 % in 5,0 %. Pravilnost smo ocenili z odstopanjem povprečja meritev od tarčne vrednosti, kjer je bila pristranskost vseh treh kontrol med 1,1 % in 2,2 %. Nato smo po istem postopku ocenili še natančnost in pravilnost za metodo MucoPAP-F. Koeficienti variacij kontrolnih vzorcev znotraj serije so se gibali med 14,2 % in 19,2 %, med serijami med 3,4 % in 10,8 %, pristranskost pa med 1 % in 12 %. V zadnjem koraku smo določili še mejne vrednosti za IRT in v ta namen analizirali 2793 vzorcev novorojencev. Za mejo, ki bo predstavljala kriterij za uvrstitev pacienta v drugi nivo presejanja, smo izbrali 99. centil, kar ustreza 61,4 ng/ml. Pri 99,9. centilu (114,4 ng/ml) smo določili dodatno mejo za zelo visoke vrednosti, pri kateri se bodo pacienti uvrstili neposredno na potrditveno diagnostiko. Izmed vseh novorojencev, ki smo jih analizirali, so bili trije, ki so ustrezali temu kriteriju. Pri enem iz med njih so v laboratoriju kasneje odkrili patološko homozigotno spremembo gena CFTR in s tem potrdili cistično fibrozo. Z rezultati smo dokazali, da metodi dosegata ustrezne analitične kriterije in sta primerni za klinično uporabo. Presejalno testiranje novorojenev za cistično fibrozo v Sloveniji bo omogočilo prepoznavanje bolezni pri otrocih še pred pojavom kliničnih znakov in s tem takojšne zdravljenje ter posledično bolj kakovostno in daljše življenje bolnikov.20242024-09-28 08:45:20Magistrsko delo/naloga162888VisID: 111131sl