Izražanje rekombinantne cisteinske proteaze Cwp84 v bakteriji Escherichia coliOletič, Michelle (Avtor) Novinec, Marko (Mentor) Cwp84SlpAClostridioides difficileGSTEna izmed najbolj pogostih bolnišničnih okužb je okužba z bakterijo Clostridioides difficile, ki povzroča hudo in ponavljajočo se diarejo. Zadnje čase okužbo s to bakterijo povezujejo tudi s primeri kolitisa. Patogenost bakterije izhaja iz toksinov A in B, je pa tudi ključen korak kolonizacija črevesja. Pri tem so ključni proteini S-plasti. Najpomembnejši protein S-plasti je protein površinske plasti A (SlpA), ki homogeno sestavlja celotno S-plast. Še bolj pomemben pa je proces samosestavljanja te plasti, pri katerem sodeluje cisteinska proteaza Cwp84. Cwp84, 84 kDa velik membranski encim, pred začetkom sestavljanja S-plasti cepi SlpA na dve enoti, eno z nizko molekularno maso (LMW) in drugo z visoko molekularno maso (HMW). Bakterije v obliki spor so v človeškem telesu skoraj nedostopne imunskemu sistemu, zato je pomembno raziskati načine, ki bi lahko inhibirali pravilno zorenje S-plasti in njeno samosestavljanje. Predvidevali smo, da bi inhibicijo cisteinske proteaze Cwp84 lahko izkoristili za razvoj protimikrobnih sredstev v kombinaciji z antibiotiki. Zato smo želeli v sklopu magistrske naloge izraziti fragment encima Cwp84, ki vsebuje katalitično in lektinu podobno domeno. V ta namen smo zapis za fragment encima Cwp84 vključili v dva vektorja, eden od teh je imel fuzijsko oznako GST, ki bi nam pomagala pri pravilnem zvijanju encima in njegovi izolaciji. Kljub več poskusom encima Cwp84 nismo uspeli izraziti in pomeriti njegovih kinetičnih lastnosti.20242024-09-25 12:05:00Magistrsko delo/naloga162583VisID: 22971COBISS_ID: 216124419sl