Izolacija serinske proteinaze VaaSP-6 iz strupa modrasa in karakterizacija njenih lastnostiPočič, Jernej (Avtor) Križaj, Igor (Mentor) Leonardi, Adrijana (Komentor) Serinske proteazeVaaSP-6prokoagulantitoksinologijamodrasSerinske proteaze iz kačjih strupov so kompleksni in multifunkcionalni encimi, ki primarno vplivajo na hemostazo. Različne vrste serinskih proteaz v strupu povzročajo antikoagulantne in prokoagulantne učinke. Molekule, ki imajo slednje lastnosti, so manj zastopane. Iz predhodnih raziskav strupa modrasa (Vipera ammodytes ammodytes) poznamo cDNA zaporedje serinske proteaze VaaSP-6 in s tem njeno aminokislinsko zaporedje, vendar njene biološke aktivnosti in molekulskega mehanizma še ne. Glede na visoko sekvenčno podobnost, predvidevamo, da je molekulski mehanizem njenega delovanja podoben sorodnemu encimu VaaSP-VX. Le-ta aktivira faktorja strjevanja krvi V in X (FV in FX) ter tako deluje prokoagulantno. V magistrskem delu smo iz strupa modrasa uspešno izolirali proteazo VaaSP-6 z uporabo velikostno izključitvene kromatografije, kationsko izmenjevalne kromatografije in tekočinske kromatografije visoke ločljivosti z obrnjeno fazo ter njeno prisotnost potrdili z masno spektrometrijo. Z dvodimenzionalno gelsko elektroforezo smo ji določili izoelektrične točke v območju pH 4,5–7,5 in navidezno molekulsko maso 35 kDa. Raziskali smo njen vpliv na proces strjevanja krvi s testiranjem aktiviranega parcialnega tromboplastinskega časa, protrombinskega časa in trombinskega časa. Pokazali smo, da proteaza VaaSP-6, za razliko VaaSP-VX, podaljša aktivirani parcialni tromboplastinski čas in protrombinski čas t.j. deluje antikoagulantno. Dodatno smo pokazali, da ne razgrajuje fibrinogena, in ne aktivira FX.[J. Počič]20242024-09-25 07:18:02Magistrsko delo/naloga162534UDK: 543.645.4:612.014.46(043.2)VisID: 246779COBISS_ID: 211800835sl