Izražanje γ-enolaze in njeno uravnavanje s katepsinom X v poškodovanih dopaminergičnih nevroblastomskih celicah SH-SY5YGržin, Lora (Avtor) Pišlar, Anja (Mentor) Horvat, Selena (Komentor) nevrodegeneracijaParkinsonova bolezencelice SH-SY5Ygama-enolazakatepsin XParkinsonova bolezen je nevrodegenerativna bolezen, pri kateri pride do progresivne izgube funkcije ali strukture dopaminergičnih nigrostriatnih nevronov. Zaradi pomanjkanja učinkovite terapije z malo neželenimi učinki in pomanjkanja podrobnega poznavanja patofiziološkega ozadja bolezni se razvijajo celični modeli bolezni, ki posnemajo nevrodegeneracijo pri Parkinsonovi bolezni. V magistrski nalogi smo proučevali izražanje γ-enolaze, ki izkazuje nevrotrofično delovanje, in njeno uravnavanje s katepsinom X. Najprej smo s celično linijo SH-SY5Y vzpostavili model diferenciacije do dopaminergične podvrste. Celice SH-SY5Y smo diferencirali z retinojsko kislino in kombinacijo retinojske kisline s forbol-12-miristat-13-acetatom. Z opazovanjem morfoloških lastnosti, določanjem ravni izražanja dopaminergičnih označevalcev in lokalizacijo dopaminergičnega označevalca smo potrdili diferenciacijo v dopaminergično podvrsto. Na dopaminergični podvrsti smo vzpostavili model nevrodegeneracije z nevrotoksinom 6-hidroksidopaminom. Z merjenjem deleža mrtvih celic smo določili najprimernejši koncentraciji 6-hidroksidopamina (50 in 100 µM) in čas delovanja nevrotoksina (24 ur). Na vzpostavljenem modelu nevrodegeneracije smo proučevali raven izražanja γ-enolaze in njeno ko-lokalizacijo s katepsinom X. Pokazali smo, da je raven izražanja aktivne oblike γ-enolaze višja pri diferenciranih celicah, medtem ko višja koncentracija 6-hidroksidopamina zniža raven aktivne oblike γ-enolaze. Slednja v diferenciranih celicah z izraženim dopaminergičnim fenotipom močno ko-lokalizira s katepsinom X, ki cepi zadnji aminokislini C-končnega dela γ-enolaze in s tem preprečuje vezavo na γ1-sintrofin, ki omogoča translokacijo na celično membrano, kjer izkazuje nevrotrofično aktivnost. Izpostavitev diferenciranih celic 6-hidroksidopaminu se odraža v znižani ravni aktivne oblike γ-enolaze, kar sovpada tudi s povišano aktivnostjo katepsina X v diferenciranih celicah, izpostavljenih 6-hidroksidopaminu. Zaviralec katepsina X AMS36 je izkazoval potencialni zaščitni učinek na nevrotoksične učinke 6-hidroksidopamina, hkrati pa je vplival na povišano raven aktivne oblike γ-enolaze v poškodovanih celicah. V magistrski nalogi smo torej pokazali pomen uravnavanja aktivne oblike γ-enolaze s proteolitičnim encimom katepsinom X v s 6-hidroksidopaminom poškodovanih celicah SH-SY5Y, diferenciranih do dopaminergične podvrste.20242024-09-15 07:45:04Magistrsko delo/naloga161867VisID: 108739sl