Identifikacija determinant profaga GIL01, ki vplivajo na sporulacijo bakterije Bacillus thuringiensis serovar israelensisOgrin, Ana (Avtor) Butala, Matej (Mentor) bakteriofagitemperatni bakteriofag GIL01sporulacijaBacillus thuringiensis serovar israelensisBakteriofag GIL01 je temperatni fag iz družine Tectiviridae, ki inficira bakterijo Bacillus thuringiensis serovar israelensis. Po okužbi obstaja v gostiteljski celici kot linearni profag, ki se pomnožuje neodvisno od bakterijskega kromosoma. Genom GIL01 obsega 14931 bp in 30 ORF. Geni, katerih produkti sodelujejo pri skupnih procesih, so locirani skupaj na genomu. Tandemska promotorja P1 in P2 regulirata izražanje genov za replikacijo in transkripcijo genoma GIL01 (ORF1-ORF8). Promotor P3 regulira izražanje genov za prepoznavo gostitelja, sestavljanje kapside in lizo gostiteljske celice (ORF9-ORF30). V promotorskih regijah so štiri vezavna mesta za transkripcijski represor LexA t.i. dinBox, ki so pomembna za vzpostavitev lizogenije GIL01. Na koncih genoma GIL01 so terminalne ponovitve, dolge 73 bp, na katere je kovalentno vezan terminalni protein in služijo pri replikaciji genoma. Produkti bakteriofagov lahko regulirajo sporulacijo gostiteljske celice. Bakterijske spore nudijo bakteriofagom zaščito in možnost popravljanja DNA ter možnost boljšega prenosa bakteriofagov v okolju. Predhodni rezultati na Katedri za biokemijo so pokazali, da lizogenija GIL01 sicer asporogenemu sevu Bacillus thuringiensis serovar israelensis GBJ002 povrne zmožnost sporulacije. Determinanta oz. regulator profaga GIL01, ki vpliva na sporulacijo, še ni identificirana. Pričakovali smo, da se regulator sporulacije B. thuringiensis serovar israelensis nahaja v prvem operonu (ORF1-ORF8), v regulatorni domeni genoma profaga GIL01. Z molekulskim kloniranjem odsekov genoma GIL01 ORF1-ORF8, P1P2ORF1-ORF8, ORF9-ORF22 in ORF23-ORF30 v plazmidni vektor pDG148 in testom sporulacije smo pokazali, da je za regulacijo sporulacije potreben celoten genom GIL01 oz. lizogenija GIL01. Izražanje genskih produktov ORF1-8 ali ORF9-22 ali ORF23-30 ima negativen učinek na rast gostiteljske celice.[A. Ogrin]20242024-09-15 07:17:38Magistrsko delo/naloga161848UDK: 578.347:579.852.11:579.22VisID: 245382COBISS_ID: 207706883sl