Načrtovanje himernih antigenskih receptorjev z uporabo alternativnih kostimulatornih domen iz signalnih poti celic TKoplan, Eva (Avtor) Fink, Tina (Mentor) CAR-Tcelična terapijaimunoterapija rakakostimulatorne domenestruktura CARLATImunoterapija s celicami T, ki imajo vgrajen himerni antigenski receptor (celice CAR-T) ima poleg številnih pozitivnih učinkov tudi nekaj pomanjkljivosti, kot so prekomeren imunski odziv, neuspešno zdravljenje in ponovitev bolezni. V izogib temu je potrebno načrtovati konstrukte CAR, ki bi imeli nižji aktivacijski prag in tako ob nižji koncentraciji tumorskega antigena prožili močen protitumorski odziv. Receptorji na celicah CAR-T so kompleksne strukture, ki omogočajo številne spremembe in posledično različne odzive na tumorski antigen. V magistrski nalogi smo pripravili različne genske konstrukte, ki so vsebovali spremembe v kostimulatornih domenah ter kombinacije pristopov za ojačanje odziva. Izražanje CAR na površini elektroporiranih celic Jurkat smo preverili z metodo pretočne citometrije, z metodo ELISA pa smo spremljali izločanje hIL-2, ki je bilo povečano ob dodatku povezovalnega člena za aktivacijo celic T (LAT) v kombinaciji s kostimulatorno domeno 4-1BB. Prisotnost variabilnega fragmenta CD20 v strukturi CAR je kazala močnejši protitumorski učinek v primerjavi s CD19 različico. Prav tako je dodatek alternativne domene SLP-76 iz mikrogruče LAT v strukturo CAR pozitivno vplival na izločanje hIL-2 ob prisotnosti kostimulatorne domene 4-1BB. Pokazali smo tudi, da se CAR-T s kostimulatorno domeno iz T-celičnega signaliziranja aktivira tudi ob odsotnosti CD3ζ domene. Uspešno smo testirali tudi nekaj pristopov za znižanje tonične signalizacije, kot so zamenjave različnih tirozinov v LAT, mutacije v genskih regijah, ki kodirajo motive ITAM, in kombinacije teh dveh pristopov.20242024-09-15 07:15:56Magistrsko delo/naloga161837VisID: 245371COBISS_ID: 207690755sl