Vpliv C-končne α-vijačnice na delovanje proteinov NLPPotočnik, Ana (Avtor) Anderluh, Gregor (Mentor) Pavšič, Miha (Komentor) porotvorni proteininterakcija protein-lipidfunkcijska analizaProteini NLP (angl. Necrosis and ethylene inducing peptide 1 (Nep1)-like protein) so pomembni mikrobni virulentni dejavniki, ki rastlinskim patogenom omogočajo poškodbe celic in invazijo tkiv. Izločajo jih številne fitopatogene bakterije, glive in oomicete. Specifična vezava proteinov NLP na sfingolipid glikozil inozitol fosforilceramid (GIPC) v rastlinski membrani povzroči nastanek majhnih nestabilnih membranskih por zaradi agregacije proteinov, kar vodi v celično smrt in nekrozo tkiv. V magistrskem delu smo pripravili in očistili mutanti proteina NLP$_{Pya}$ oomicete Pythium aphanidermatum, da bi preverili vpliv C-končne α-vijačnice in morebitnega aromatskega stikala na delovanje proteinov NLP. Analiza temperaturne stabilnosti z diferenčno dinamično fluorimetrijo in cirkularnim dikroizmom je pokazala rahlo spremembo zvitja mutant v primerjavi z divjim tipom. Na splošno zvitje proteina uvedba mutacij ne vpliva, saj imajo mutante podobno temperaturo tališča kot divji tip. Analiza vezave s sedimentacijskim testom je pokazala nižjo zmožnost vezave mutant na multilamelarne vezikle s sestavo palmitoil-oleoil fosfatidilholina, glikozilinozitol fosfoceramida (GIPC) in rastlinskih sterolov v množinskem razmerju 1 : 6 : 3, ki posnemajo membrane rastlinskih celic, nespecifično pa sta se vezali tudi na kontrolne vezikle. S testom infiltracije v liste rastline tobaka in merjenjem sproščanja ionov iz celic s konduktometrijo smo pokazali nižjo citotoksično aktivnost mutant glede na divji tip proteina. Nadaljnje raziskovanje molekularnega mehanizma delovanja proteinov NLP in njihove zgradbe je pomembno zaradi njihove potencialne vloge v razvoju njihovih inhibitorjev in herbicidov.20242024-09-12 13:10:00Magistrsko delo/naloga161592VisID: 22794COBISS_ID: 215148291sl