Vpliv točkovne mutacije Y283C na lastnosti človeškega katepsina KKarčovnik, Maša (Avtor) Turk, Boris (Mentor) človeški katepsin Kmutacija Y283CkolagenazapiknodisostozaKatepsin K je lizosomska cisteinska peptidaza, ključna pri razgradnji kostnine. Katepsin K se sprosti iz lizosomov zrelih aktiviranih osteoklastov v zapečateno območje (ang. sealing zone), kjer se zaradi nizkega pH razgrajujejo mineralne komponente kosti, kar katepsinu K in ostalim peptidazam omogoči dostop do organskega matriksa kosti. Katepsin K učinkovito razgrajuje kolagen, pri čemer nastajata fragmenta NTX in CTX, pomembna biološka označevalca pri boleznih kosti, kot sta osteoporoza ali piknodisostoza. V eksperimentalnem delu smo preučevali vpliv točkovne mutacije Y283C človeškega katepsina K, ki vodi v razvoj piknodisostoze. Vključek za katepsin K z omenjeno točkovno mutacijo smo vnesli v plazmidni vektor pET-28b(+). Divji tip in mutirano obliko katepsina K smo izrazili v E. coli. Primerjali smo izražanje obeh proteinov, njuno aktivacijo ter proteolitično aktivnost. Aktivacija divjega tipa prokatepsina K je potekla več kot stokrat hitreje kot mutiranega proteina. Proteolitično aktivnost smo določali z uporabo fluorescenčnega substrata Z-Phe-Arg-AMC, kolagenolitično aktivnost pa s kolagenom. Določili smo nizko proteolitično aktivnost mutiranega katepsina K na substrat Z-Phe-Arg-AMC, kar je verjetno posledica slabe aktivacije cimogena. Mutiran katepsin K je tudi mnogo slabša kolagenaza in želatinaza v primerjavi z divjim tipom katepsina K.20242024-09-10 12:30:01Diplomsko delo/naloga161366VisID: 24155COBISS_ID: 214936323sl