Analiza protivnetnega in antioksidativnega delovanja tavrina na modelu intersticijskega cistitisa in vitroBohte, Janja (Avtor) Veranič, Peter (Mentor) intersticijski cistitistavrinurotelijske celicekrvno-urinska pregradaIntersticijski cistitis (IC) je kronična vnetna bolezen sečnega mehurja brez bakterijske okužbe ali katerega drugega prepoznavnega patološkega vzroka. Simptomi vključujejo pogosto in boleče uriniranje, nočno uriniranje ter kronično bolečino na področju medenice. Diagnostika obolenja je kompleksna, prav tako pa ni na voljo zdravljenja, ki bi doseglo dolgoročne učinke. To je predvsem povezano z za zdaj še nepoznanimi vzroki za nastanek in napredovanje bolezni. Za patogenezo intersticijskega cistitisa je značilna poškodba urotelija in zvečana prepustnost krvno-urinske pregrade, zaradi česar pride do prehajanja neželenih molekul iz urina v steno sečnega mehurja ali globje, kar privede do vnetja. K temu prispeva tudi oksidativni stres, ki je značilen za številne vnetne kronične bolezni. Študije nakazujejo tudi na zmanjšano izražanje proteinov tesnih in adhezijskih stikov pri bolnikih z IC. Glede na to, bi bilo potrebno najti zdravilo, ki bi vplivalo na več različnih procesov in bioloških poti ter bi imelo tako protivnetne kot antioksidativne učinke, hkrati pa bi vplivalo na funkcijo krvno-urinske pregrade. Ena izmed takih možnosti je tavrin. Tavrin (2-aminoetansulfonska kislina) je neproteinogena aminokislina, ki jo najdemo v različnih živalskih tkivih in ima pomembno vlogo pri številnih bistvenih bioloških procesih. Pri ljudeh se tavrin tvori pri presnovi metionina in cisteina v hepatocitih. Rastoče število študij potrjuje, da tavrin blaži vnetje in oksidativni stres. To doseže z zaviranjem nastajanja vnetnih mediatorjev in spodbujanjem izražanja antioksidativnih encimov. Poleg tega tavrin krepi medcelični stike v različnih epitelijskih pregradah, kar utrjuje njihovo zaščitno funkcijo. Naše raziskovanje se je osredotočilo na vpliv tavrina na izražanje genov v urotelijskih celicah celične linije SV-HUC-1. Preučevali smo, ali tavrin vpliva na raven izražanja protivnetnih in antioksidativnih genov ter genov, ki kodirajo proteine medceličnih stikov, v primerjavi s celicami, ki so bile izpostavljene samo sprožilcu oksidativnega stresa in vnetja (glukozna oksidaza). V ta namen smo uporabili metodo kvantitativne PCR (qPCR). Rezultate smo preverili tudi na proteinski ravni z uporabo encimsko-imunskega testa na trdnem nosilcu (ELISA) in fluorescenčne mikroskopije. Pridobljeni rezultati kažejo, da tavrin deluje protivnetno, saj je ob dodatku tavrina prišlo do zmanjšanja izražanja gena za vnetni citokin IL-6 ter zmanjšanega izločanja IL-6 in IL-8 v supernatante celic, ki so bile izpostavljene oksidativnemu stresu. Tavrin je prav tako povečal izražanje gena za antioksidativni encim katalazo (CAT), medtem ko na izražanje ostalih preučevanih genov, ki so vpleteni v oksidativni stres, ni vplival. Na osnovi analize qPCR in fluorescenčne mikroskopije smo potrdili tudi, da tavrin poveča izražanje gena in proteina tesnega stika ZO-1 ter adhezijskega proteina E-kadherin, kar bi lahko nakazovalo na njegov vpliv na izboljšanje funkcije krvno-urinske pregrade. Dodatne klinične in eksperimentalne študije na živalskih modelih bi lahko potrdile potencial tavrina kot terapevtskega agensa za zdravljenje intersticijskega cistitisa.20242024-08-28 11:55:00Diplomsko delo/naloga160417VisID: 24277COBISS_ID: 206080515sl