Optimizacija pripravljalnih procesov pri proizvodnji rekombinantnih vektorjev adenovirusom pridruženih virusovStanković, Petra (Avtor) Dobnik, David (Mentor) rAAVgenska terapijapripravljalni procesigenski inženiringbiotehnologijaKončni produkt proizvodnje rekombinantnih vektorjev adenovirusom pridruženih virusov (rAAV) je običajno mešanica polnih in praznih kapsid, pri čemer lahko poleg željenega rekombinantnega genoma polne virusne kapside vsebujejo tudi nečistote, kot so ostanki plazmidov, DNA gostiteljskih celic in fragmenti genomov. Za varno in učinkovito zdravilo je ključna količina celih rekombinantnih genomov. Raziskave so pokazale, da je mogoče ta cilj doseči z optimizacijo različnih korakov pripravljalnih procesov proizvodnje rAAV vektorja. V tej diplomski nalogi je na podlagi trenutno dostopne literature predstavljen pristop za pridobitev večje količine bolj kakovostnega produkta. Poleg več točk nadzora kakovosti in predloga za uporabo nekaterih novejših tehnologij, kot sta ddPCR in monolitska kromatografija, se predlaga tudi možnost spremembe zaporedja samega plazmida. Nekatere študije so namreč pokazale, da uporaba Rep in Cap genov istega serotipa poveča kakovost izdelka. Tudi uporaba dodatnega zaporedja, "distančnika", zmanjša količino zapakiranih neželenih delov genoma. Prav tako je za uravnavanje časa proizvodnje virusnih kapsid predlagana uporaba tetraciklinsko induciranega promotorja. Na koncu je podan tudi predlog protokola za izboljšano proizvodnjo rAAV. Predlagani protokol tako vključuje celovit pristop k optimizaciji proizvodnje, ki temelji na najnovejših raziskavah in tehnologijah ter predstavlja izhodišče za praktične raziskave v prihodnosti.20242024-08-24 07:15:07Diplomsko delo/naloga160254VisID: 240714COBISS_ID: 205251587sl