Analitska občutljivost in specifičnost verižne reakcije s polimerazo za detekcijo mukormicetnih plesniKoblar, Nuša (Avtor) Matos, Tadeja (Mentor) glivne okužbemukormikozaMucoralesmikrobiološke metodemetoda multipleksne PCR v realnem časudiagnostika mukormikozeMucorGenius®Mukormikoze so angioinvazivne glivne okužbe, ki jih povzročajo mukormicete oziroma plesni reda Mucorales. Mukormikoza se pojavlja pri imunsko oslabljenih bolnikih, zanjo je značilno hitro napredovanje bolezni, slaba prognoza in visoka smrtnost. Hitra diagnoza mukormikoze izboljša izid in preživetje bolnikov. Laboratorijska diagnostika sloni na tradicionalnih mikrobioloških tehnikah kot so direktna mikroskopija, glivne kulture in histologija, ki pa imajo slabo občutljivost in zahtevajo izkušeno laboratorijsko osebje in kar je najpomembneje, do rezultatov pridemo šele po nekaj dneh inkubacije. Namen magistrske naloge je bil proučiti možnosti za dopolnitev klasičnega pristopa diagnostike mukormicetnih plesni z molekularno metodo multipleksne verižne reakcije s polimerazo (PCR) v realnem času z uporabo kompleta reagentov MucorGenius® Multiplex Real-Time PCR, zato smo preverili občutljivost in specifičnost te metode. V raziskavo smo vključili 9 askomicetnih in 11 mukormicetnih plesni. Pripravili smo suspenzijo sporangiofor posameznih plesni v koncentraciji z optično gostoto, ekvivalentno 0,5 po McFarlandovem standardu in v primeru mukormicetnih plesni suspenzijo redčili za faktor redčenja 10 do 107. Iz začetne suspenzije in vseh nadaljnjih redčitev (v primeru mukormicetnih plesni) smo izolirali DNA in izvedli multipleksni PCR v realnem času z uporabo kompleta reagentov MucorGenius®. Obenem smo za namen kvantifikacije vsako redčitev mukormicetnih plesni konfluentno nacepili na gojišče po Saboraudu za določitev koncentracije sporangiofor (CFU/ml). Za mukormicetne plesni Rhizopus microsporus, Mucor circinelloides in Lichtheimia corymbifera, smo iz najnižje, srednje in najvišje redčitve posamezne vrste, ki je še dala pozitiven rezultat, multipleksni PCR v realnem času ponovili še 12-krat. Po statistični analizi smo ugotovili, da je analitska občutljivost multipleksnega PCR v realnem času z uporabo kompleta reagentov MucorGenius® 91,7 %, analitska specifičnost pa 100 %. Menimo, da bi bila metoda multipleksnega PCR v realnem času z uporabo MucorGenius®, primerna za dopolnitev klasične diagnostike.[N. Koblar]20242024-05-26 07:15:13Magistrsko delo/naloga156464UDK: 616.992:57.083VisID: 236559COBISS_ID: 196704515sl