Mehanizem delovanja in sodelovanja treh ključnih virulenčnih dejavnikov bakterije Listeria monocytogenesPetrišič, Nejc (Avtor) Podobnik, Marjetka (Mentor) interakcije membranskih proteinov z membranamilisterijske fosfolipaze Clisteriolizin Omakromolekularna kristalografijapresevna elektronska mikroskopija pod krio pogojistrukturne prilagoditveListeria monocytogenesListeria monocytogenes (Lm) je znotrajcelični bakterijski povzročitelj listerioze, potencialno smrtonosne okužbe, ki se prenaša s hrano. Trije glavni virulenčni dejavniki Lm so listeriolizin O (LLO) in dve fosfolipazi: širokospecifična fosfolipaza C (LmPC-PLC) in fosfatidilinozitol-specifična fosfolipaza C (LmPI-PLC). Glavni poudarek raziskav te doktorske naloge je bila funkcijska in strukturna analiza LmPC-PLC in njenih interakcij z LLO. Določili smo kristalno zgradbo LmPC-PLC in z dodatnimi biokemijskimi in biofizikalnimi eksperimenti smo pokazali dejavnike, ki regulirajo delovanje LmPC-PLC. Kristalna struktura razkriva, da je LmPC-PLC razvila več strukturnih posebnosti za uravnavanje svoje aktivnosti, vključno s položajem stranske skupine N-terminalnega triptofana (W1), strukturno plastičnim aktivnim mestom, od Zn2+ odvisno aktivnostjo in težnjo po tvorbi neaktivnih oligomerov. V nadaljevanju smo ugotovili aktivacijo LmPC-PLC s holesterolom, kar nakazuje na usmerjeno delovanje na gostiteljeve membrane. Opisali smo specifično inhibicijo LmPC-PLC z dodatkom njenega propetida in trans, kar odpira pot za razvoj specifičnih inhibitorjev, v namene zdravljenja okužb s sevi Lm, ki so odporni na antibiotike. Proučevali smo tudi sinergijo med LmPC-PLC in LLO ter ugotovili sinergistični vpliv LmPC-PLC na vezavo LLO na membrane in njegovo premabilizacijsko aktivnost. Ravno tako smo pokazali, da predinkubacija lipidnih membran z LmPC-PLC vpliva na morfologijo oligomerov, ki jih tvori LLO. Ta raziskava prinaša pomemben vpogled v strukturo in funkcijo LmPC-PLC, ki ima potencial kot terapevtska tarča pri zdravljenju listerioze, ter odkriva nove mehanizme sinergije med LmPC-PLC in LLO, kar znatno prispeva k razumevanju patofiziologije Lm.[N. Petrišič]20242024-05-08 07:15:44Doktorsko delo/naloga156089UDK: 66.095.261:66.065.5:543.442.3(043.3)VisID: 236517COBISS_ID: 194839299sl