Vpliv procesnih parametrov na tvorbo lipidnih nanodelcev z vgrajeno zdravilno učinkovino na osnovi siRNKLukančič, Nina (Avtor) Časar, Zdenko (Mentor) Pavšič, Miha (Komentor) mala interferenčna RNAlipidni nanodelciprocesni parametrifizikalno-kemijske lastnosti lipidnih nanodelcevOligonukleotidi, kot je mala interferenčne RNA (siRNA), so obetavna oblika zdravil za zdravljenje širokega spektra bolezni. Oligonukleotidne zdravilne učinkovine inducirajo terapevtske učinke z modulacijo izražanja genov. Pred dvema desetletjema je bilo odkrito, da s postopkom imenovanim interferenca RNA lahko vnos sintetičnih siRNA v citoplazmo povzroči specifično razgradnjo/nevtralizacijo komplementarne mRNA in s tem zavirano izražanje genov. Zaradi omejene biološke uporabnosti pri sistemski aplikaciji je uporaba siRNA kot terapevtskega sredstva zahtevna. Za učinkovito dostavo siRNA v celice je bilo potrebno razviti izpopolnjeno platformo. Ključnega pomena je bil razvoj dostave siRNA z uporabo lipidnih nanodelcev (LND). Ameriška agencija za hrano in zdravila (FDA) je leta 2018 odobrila klinično uporabo prvega siRNA terapevtika, Onpattro (Patisiran), ki temelji na LND. V magistrskem delu smo z metodo etanolnega injiciranja izdelali LND z vgrajeno dvoverižno zdravilno učinkovino patisiran in ovrednotili vpliv procesnih parametrov na njihove lastnosti. Uporabili smo enake lipidne komponente kot jih uporablja komercialni produkt (Onpattro). Ovrednotili smo vpliv koncentracije patisirana v vodni fazi, koncentracije lipidov v etanolni fazi, hitrost mešanja, hitrost injiciranja, čas injiciranja, pH, temperaturo in ionsko moč na velikost LND, porazdelitev velikosti LND, zeta potencial, koncentracijo prostega patisirana in termične lastnosti LND. Z različnimi tehnikami, kot so dinamično sipanje svetlobe, diferenčna dinamična kalorimetrija, spektroskopija v UV območju in krio-elektronska mikroskopija, smo dokazali, da imajo nekateri procesni parametri statistično značilen vpliv na fizikalno-kemijske lastnosti LND, ki vsebujejo zdravilno učinkovino patisiran. Večina pripravljenih LND je bila v velikostnem območju do 500 nm, homogenih in so imeli zeta potencial v območju ± 30 mV. Temperatura tališča izdelanih LND je bila skoraj enaka kot izmerjena temperatura tališča zdravila Onpattro (Patisiran), kar posredno kaže na primerljivost delcev. Iz rezultatov je razvidno, da je na velikost LND vplivala koncentracija patisirana v vodni fazi fazi in koncentracija lipidov v etanolni fazi. Visoka koncentracija patisirana v vodni fazi in velika ionska moč sta vplivali na znižanje koncentracije vgrajenega patisirana. Na višjo entalpijo taljenja LND je vplivala večja ionska moč. Razumevanje, kateri procesni parametri vplivajo na lastnosti LND je ključno za zagotovitev ponovljivosti in robustnosti procesa njihove priprave. Dostava oligonukleotidnih zdravilnih učinkovin s pomočjo tehnologije LND omogoča širok potencial te tehnologije v najrazličnejših prihodnjih aplikacijah.20232023-12-21 08:50:00Magistrsko delo/naloga153305VisID: 21844COBISS_ID: 178525443sl