Določanje krvne skupine Duffy z metodo verižne reakcije s polimerazo v realnem času v primerih imunohematološko neopredeljivih rezultatov za antigen Fy(b)Turkalj, Iris (Avtor) Jeras, Matjaž (Mentor) Dovč Drnovšek, Tadeja (Komentor) krvna skupina DuffyserologijagenotipizacijaPCR v realnem časualgoritem testiranja.V transfuzijski medicini je določitev antigenov krvnoskupinskega sistema Duffy pri krvodajalcih pomembna, saj morebitna prisotnost protiteles proti tem antigenom pri bolnikih povzroča nastanek hemolitične transfuzijske reakcije po transfuzijah v tej krvni skupini neskladnih eritrocitov. Na Zavodu RS za transfuzijsko medicino so pri določanju antigenov Fyb sistema Duffy krvodajalcev z uporabo novega avtomatiziranega sistema Erytra na gelskih karticah (Grifols) naleteli na neopredeljive rezultate. V okviru magistrskega dela smo zato želeli nadgraditi že delno vpeljano metodo qPCR za molekularno biološko določitev krvne skupine Duffy in pripraviti algoritem za testiranje krvodajalcev s serološko neopredeljivimi rezultati za antigen Fyb. Z optimizacijo reakcije qPCR za določitev prisotnosti polimorfizma posameznega nukleotida FY 265C>A z metodo alelske diskriminacije in s podatki iz literature, smo pri preiskovancih lahko pravilno napovedali prisotnost alelov FY*02W.01/.02, ki sta odgovorna za nastanek antigena Fyb+w. Na osnovi podatkov iz literature smo na genu FY izbrali polimorfno mesto -67T>C, optimizirali reakcijo qPCR in na podlagi naših rezultatov z metodo alelske diskriminacije qPCR lahko pravilno napovedali prisotnost alela FY*02N.01, ki je odgovoren za odsotnost antigena Fyb na eritrocitih. Reakcije qPCR smo izvedli na vzorcih krvodajalcev z neopredeljivimi serološkimi rezultati za antigen Fyb, pridobljenimi z novim sistemom Erytra. Pri vseh vzorcih smo s kombinacijo rezultatov genotipizacije uspeli določiti genotip in predvideti fenotip sistema Duffy. Pri tem, se je izkazalo, da je imelo le 50 % preiskovancev genotip FY*A/FY*02W.01/.02, torej fenotip Fy(a+b+w). Za pripravo algoritma testiranja krvodajalcev s serološko neopredeljivimi rezultati za antigen Fyb pri testiranju z analitskim sistemom Erytra, smo izvedli analizo dodatnih seroloških testov, opravljenih na gelskih karticah Bio-Rad in v epruvetah. Primerjava teh rezultatov z rezultati metode qPCR z alelsko diskriminacijo kot zlatim standardom ter z uporabo t.i. matrike zmede v velikosti šestih celic je pokazala, da je test v epruveti boljši serološki test. Rezultat našega dela je predlog algoritma, po katerem bi vzorce z neopredeljivimi rezultati za antigen Fyb na aparatu Erytra, v nadaljevanju testirali v epruveti. V primeru nadaljnjih negativnih in neopredeljivih rezultatov bi testiranje nadaljevali z metodo qPCR. Predlagani algoritem se je izkazal kot primeren za določanje prisotnosti antigena Fyb+w.20232023-10-19 07:45:04Magistrsko delo/naloga151748VisID: 102992sl