Kloniranje in priprava proteina Obg iz bakterije Neisseria gonorrhoeaeSotlar, Špela (Avtor) Gunčar, Gregor (Mentor) Neisseria gonorrhoeaeObg proteinIVA kloniranjeNeisseria gonorrhoeae je patogena bakterija, ki povzroča spolno prenosljivo bolezen gonorejo. Njena sposobnost izmikanja imunskemu sistemu in povzročanju večkratnih okužb povzroča težave pri zdravljenju bolezni. Trenutno zdravljenje s cefalosporini postaja vse manj učinkovito, s pojavom odpornih sevov v Aziji, Evropi in Severni Ameriki, zato je nujna identifikacija novih tarčnih proteinov. Obg protein je evolucijsko ohranjena GTPaza, ki je odgovorna za bakterijski odgovor na stres, separacijo kromosomov in zorenje ribosomov. Veže se na ribosomsko podenoto 50S in ob hidrolizi GTP povzroči pravilno zvitje podenote. Ob zbitju gena se preživetje bakterije drastično zmanjša. Zapis za gen obg smo vstavili v vektor pMSCG7 s pomočjo IVA kloniranja. Konstrukt smo nato izolirali iz celic E. coli DH5α in vstavili v celice ekspresijskega seva E. coli BL21 [DE3] pLys-S. Po določitvi optimalne temperature za izražanje, 37 °C, smo izrazili in izolirali približno 30 mg proteina. Manjšo količino očiščenega proteina smo poskusili kristalizirati, na rezultate še čakamo. V nadaljnjem delu bomo identificirali pogoje za rast kristalov tega proteina in določili njegovo strukturo.20232023-09-08 13:10:00Diplomsko delo/naloga149725VisID: 22748COBISS_ID: 171655939sl