Izražanje konformacijsko zaklenjenega alfa-aktininaLoborec, Mark (Avtor) Pavšič, Miha (Mentor) α-aktininkalcijkonformacijske spremembeα-aktinin je aktin vezavni protein, ki igra pomembno vlogo pri vrsti celičnih struktur, od kontraktilnega obroča do citoskeleta in sarkomer, sodeluje pa tudi pri premikanju celic. Pojavlja se v obliki dimera, v katerem je vsaka podenota sestavljena iz aktin vezavne domene, vratu, spektrinskih ponovitev in kalmodulinu podobne domene. Poznamo na kalcij občutljive in na kalcij neobčutljive oblike α-aktinina. V tej nalogi smo želeli raziskati, kje se zgodijo najpomembnejše konformacijske spremembe ob vezavi kalcija na kalcij občutljiv α-aktinin 1. V ta namen smo – na osnovi kristalne strukture α-aktinina 1 z vezanim Ca2+ – ¬načrtali, klonirali in izrazili tri mutante, od katerih vsak zaklene del strukture α-aktinina v kalcij vezano obliko. Mutante smo nato izolirali z različnimi kromatografskimi tehnikami in za mutante, v katere smo uvajali cisteinske ostanke na različne verige – kar bi moralo voditi do nastanka kovalentno povezanih dimerov – na NaDS-PAGE, preverili, ali se podenote kovalentno povežejo v dimere. Tvorbo dimerov smo potrdili pri enem od dveh mutantov, pri katerih smo to pričakovali. Pri drugem mutantu smo tvorbo disulfidnih vezi poskusili vzpodbuditi še z inkubacijo v oksidativnem okolju in v prisotnosti kalcija, a smo bili neuspešni. Mutante bodo uporabljene za analizo tvorbe aktinskih snopov.20232023-09-07 11:25:00Diplomsko delo/naloga149506VisID: 22664COBISS_ID: 169265923sl