Optimizacija metod za visokozmogljivo transformacijo kvasovkr Saccharomyces cerevisiaeHafner, Luka (Avtor) Petrovič, Uroš (Mentor) Saccharomyces cerevisiaetransformacijarastna krivuljaKemijsko transformacijo kvasovke Saccharomyces cerevisiae običajno izvajamo v mikrocentrifugirkah. Kadar je potrebno izvesti veliko transformacij, kot na primer pri pripravi knjižnice sevov z izbitimi geni, to postane zamudno. Tu se pojavi potreba po visoko zmogljivi metodi za transformacijo. V diplomski nalogi smo želeli optimizirati postopek, ki bi prihranil čas pri takšnih nalogah. Opazovali smo rast kvasovke S. cerevisiae na mikrotitrski plošči s 96 vdolbinicami in pripravili rastne krivulje. Prilagodili smo protokol za transformacijo na mikrotitrski plošči na osnovi protokola za transformacijo v mikrocentrifugirkah. S prilagojenim protokolom smo transformirali kvasovke S. cerevisiae s plazmidnimi in linearnima vektorjema. Ugotovili smo, da je transformacija celic v zgodnji eksponentni fazi rasti vsaj 10-krat bolj učinkovita od transformacije celic v pozni eksponentni fazi rasti. Kot pomembna se je izkazala natančna in enakomerna redčitev prekonočnih kultur, da hkrati dosežejo zgodnjo eksponentno fazo rasti. Transformacija na mikrotitski plošči je obetavna metoda za visokozmogljivo transformacijo kvasovke S. cerevisiae, ki omogoča znaten prihranek časa. Nadaljnje optimizacije, kot so uporaba mikrotitrskih plošč z ukrivljenim dnom in spreminjanje časa toplotnega šoka, lahko prispevajo k izboljšanju učinkovitosti transformacije.20232023-09-06 12:00:00Diplomsko delo/naloga149331VisID: 20981COBISS_ID: 168254979sl