Izražanje mehanoreceptorjev PIEZO v uroteliju med obnovo po kemijsko izzvanem cistitisuDeutsch, Maja (Avtor) Romih, Rok (Mentor) urotelijPiezociklofosfamidprenos westernimunofluorescencaUrotelij ima pomembno vlogo pri zaznavanju in posredovanju mehanskih dražljajev, ki nastopijo pri raztezanju sečnega mehurja med polnjenjem z urinom. Pri tem so ključni mehanoreceptorji v uroteliju, med njimi ionska kanala Piezo1 in Piezo2. Pri intersticijskem cistitisu, kjer je urotelij spremenjen, je zaznavanje mehanskih dražljajev moteno. Kako spremembe urotelija med cistitisom vplivajo na izražanje Piezo1 in 2, ni znano. Cistitis smo izzvali pri podganah z enkratno peritonealno injekcijo ciklofosfamida. Prisotnost mehanoreceptorjev Piezo smo preverjali s prenosom western in imunoofluorescenco. Primerjali smo različne protokole ter ustreznost metod in protiteles za imunolokalizacijo mehanoreceptorjev Piezo. Uporabili smo dve različni protitelesi proti Piezo1 in protitelo proti Piezo2 ter različna sekundarna protitelesa. S prenosom western smo prisotnost Piezo1 dokazali z enim protitelesom, medtem ko za Piezo2 protitelo ni pokazalo lis pri ustrezni velikosti. Na zamrznjenih rezinah smo z imunofluorescenco s protitelesom proti Piezo1 dokazali močnejšo reakcijo pri vzorcih, tretiranih s ciklofosfamidom v primerjavi z rezinami netretiranih podgan. Reakcija je bila prisotna na apikalni plazmalemi dežnikastih celic ter tudi na bazalnih in intermediarnih celicah. Reakcija za Piezo2 je bila šibkejša, vidna je bila v vseh treh skladih urotelija, lamini proprii in detruzorju. Pri obeh mehanoreceptorjih Piezo je bila vidna reakcija tako v vrhu in telesu sečnega mehurja, med tema predeloma razlik ni bilo. V bazi sečnega mehurja je bila v primeru Piezo1 reakcija šibka, pri Piezo2 pa le-te ni bilo. Z imunofluorescenco smo tako dokazali močnejšo reakcijo Piezo1 in Piezo2 po tretiranju s ciklofosfamidom in dokazali njihovo prisotnost v vseh skladih urotelija. Ovrednotili smo nove postopke priprave vzorcev, tako omogočili študije sečnega mehurja podgan in s tem postavili izhodišče za nadaljne študije pri ugotavljanju vloge mehanoreceptorjev Piezo med cistitisom.20232023-09-06 10:40:00Diplomsko delo/naloga149315VisID: 22723COBISS_ID: 168136707sl