Določanje proteinov z UV spektrometrijo z variabilno optično potjoGregorič, Luka (Avtor) Prosen, Helena (Mentor) SoloVPEUV-Vis spektrometrijavariabilna optična potbioanalitikaUporaba UV-Vis spektrometra za določanje koncentracije proteinov v raztopini je ena izmed temeljnih metod v bioanalitiki. Vse dosedanje metode izkoriščajo Beer-Lambertov zakon za določanje koncentracije na podlagi izmerjene absorbance pri eni valovni dolžini in konstantni optični poti. Zaradi omejitev Beer-Lambertovega zakona je potrebno raztopine redčiti. Redčenje ima lahko velik vpliv na optične lastnosti vzorcev, na točnost rezultatov raziskav ter je časovno potratno. Zato smo razvili novo metodo na podlagi prilagojenega Beer-Lambertovega zakona, pri katerem spreminjamo dolžino optične poti – torej je optična pot variabilna. Za natančno spreminjanje optične poti uporabimo sistem SoloVPE. V sklopu te magistrske naloge primerjamo meritve, kjer se spreminja optična pot. z obstoječimi sistemi, pri katerih je optična pot konstantna. Rezultate, pridobljene z uporabo variabilne optične poti, smo primerjali z rezultati, pridobljenimi s klasičnimi UV-Vis metodami, z UV metodami visoke zmogljivosti ter HPLC metodami. Primerljivost točnosti izmerjenih rezultatov smo preverili na protitelesih, denaturiranih proteinih, strukturnih proteinih, produktih encimskih reakcij in Polisorbatu 80. Prav tako smo preverili točnost meritev pri različnih valovnih dolžinah. Rezultati meritev so pokazali ponovljivost meritev (RSD ≤ 2 % med meritvami enakih vzorcev). Relativna razlika nasproti rezultatom, pridobljenim z že obstoječimi UV-Vis metodami, je praviloma bila ≤ 3 %. Pri visokih koncentracijah se je nov sistem izkazal za bolj točnega (odstopanje od teoretične vrednosti ≤ 5 %, pri obstoječih sistemih ≤ 20 %). Sistem se je izkazal za primerljivega pri analizi bioloških molekul z obstoječimi sistemi za določanje koncentracije proteinov v raztopini. Samo pri določitvi koncentracije produktov encimskih reakcij so bili rezultati neponovljivi. Zato bi bilo smiselno narediti dodatne raziskave in določiti vzroke te neponovljivosti.20232023-09-06 10:15:00Magistrsko delo/naloga149313VisID: 21710COBISS_ID: 168859395sl