Spermateka pri matici medonosne čebele (Apis mellifera L.) kot vir genetske informacije o očetovstvu v čebelji družiniPavlin, Anja (Avtor) Prešern, Janez (Mentor) Moškrič, Ajda (Komentor) spermatekamedonosna čebelaApis melliferanačin shranjevanjametoda izolacije DNArejski programočetovske linijemikrosatelitisekvenciranje naslednje generacijeUporaba vsebine spermateke matice medonosne čebele namesto posameznih potomcev (čebel delavk) za genotipizacijo prihrani čas in omogoča vpogled v sestavo očetovskih linij takoj po parjenju. Raziskali smo načine kratkotrajnega shranjevanja in metode izolacije DNA, ki omogočajo ustrezno ohranjanje spermateke med transportom za pridobivanje genetskih informacij iz spermatozoidov. Testirali smo šest različnih načinov shranjevanja spermatek, ki smo jih dopolnili z dvema metodama izolacije DNA. Uspešnost le-teh smo preverjali z analizo koncentracij DNA, RNA in proteinov v izolatih DNA ter stopnje fragmentacije DNA s pomnoževanjem markerja ANT2 in primernost kakovosti DNA za mikrosatelitno (MS) analizo. Raziskali smo tudi uporabo MS in dela zaporedja gena csd za določevanje očetovskih linij v čebelji družini. Za poskus uporabe spermateke smo za analizo MS uporabili instrumentalno osemenjene deviške matice in naravno osemenjene matice s pripadajočimi troti oziroma zalego. Za analizo dela zaporedja gena csd smo uporabili le instrumentalno osemenjene matice s pripadajočimi troti. Naši rezultati kažejo, da je razpon mediana koncentracij DNA iz spermatek, izoliranih pred shranjevanjem, ne glede na način shranjevanja in metodo izolacije DNA, na splošno nižji od razpona median koncentraciji DNA iz spermatek, izoliranih iz matic po shranjevanju. Kljub razlikam v izplenu DNA iz vzorcev ni bilo pomembnega vpliva načina shranjevanja ali metode izolacije DNA na uspeh pomnoževanja MS. Za transport pri sobni temperaturi kot medij za shranjevanje priporočamo etanol zaradi njegove dostopnosti, nizke cene, enostavnosti uporabe na terenu in v laboratoriju ter zmožnosti dobrega ohranjanja vzorcev za analizo DNA. Rezultati za določanje očetovskih linij z uporabo MS kažejo, da je analiza na vsebini spermateke enakovredna analizi na zalegi, zato menimo, da je uporaba spermateke primernejša od zalege. Rezultati preliminarnega testiranja metode za določanje očetovskih linij na vsebini spermateke z uporabo gena csd nakazujejo na potencialno uporabnost le-te.20232023-08-25 07:15:26Magistrsko delo/naloga148487VisID: 227514COBISS_ID: 162043651sl