Nadzor celic CAR-T z uporabo destabilizacijskih domenBelak, Monika (Avtor) Benčina, Mojca (Mentor) AR-Tcelična terapijadestabilizacijske domenesintezna biologija4-OHTNadzor imunskih celic T, ki izražajo himerni antigenski receptor (CAR-T celice, angl. Chimeric Antigen Receptor T cells) z uporabo destabilizacijskih domen, je pomembno orodje za natančno in prilagodljivo regulacijo aktivnosti celic CAR-T. Destabilizacijske domene služijo kot varnostna stikala in omogočajo regulacijo aktivnosti celic CAR-T, preko modulacije stabilnosti himernega antigenskega receptorja (CAR) na površini celic z uporabo majhnih molekul. Z njihovo uporabo lahko omejimo stranske učinke in resne zaplete povezane s CAR-T celično terapijo, ki so predvsem posledica njihove prekomerne aktivacije. Do danes že poznamo nekaj nadzornih sistemov na osnovi destabilizacijskih domen (na primer destabilizacijski domeni ecDHFR ali FKBP). Ti sistemi imajo omejeno terapevtsko uporabnost, saj so njihovi ligandi molekule, ki so za človeške celice toksični, ali pa proteinske komponente teh sistemov izvirajo iz drugih organizmov in lahko izzovejo imunski odziv pri človeku. V sklopu magistrske naloge smo se tako osredotočili na razširitev trenutnega nabora destabilizacijskih domen. Uporabili smo destablizacijske domene na osnovi ligand vezavne domene estrogenskega receptorja alfa (ERα), ki se aktivirajo z molekulo 4-OHT, ki je FDA odobreno zdravilo. Pripravljene konstrukte smo vstavili v sesalske celične linije in preverili izražanje receptorja CAR po stimulaciji celic s tarčno majhno molekulo 4-OHT. Destabilizacijskim domenam, ki smo jim dodali CD19 CAR, je prisotnost liganda zagotovila stabilno izražanje receptorja na površini celic. Pričakujemo, da bodo načrtovane destabilizacijske domene pripomogle k razširitvi nabora hitrih, reverzibilnih in prilagodljivih metod za uravnavanje stabilnosti proteinov v živih celicah z uporabo majhnih molekul.20232023-06-25 07:15:04Magistrsko delo/naloga147197VisID: 218868COBISS_ID: 157145091sl