Identifikacija ključnih cis-regulatornih elementov promotorja gena CPI8 za odziv na jasmonsko kislinoMatijašić, Kristina (Avtor) Lukan, Tjaša (Mentor) biosenzorinhibitor cisteinskih proteinazjasmonska kislinaluciferazni test aktivnosti promotorjevrastlinski odziv na stresregulacija prepisovanjaSolanum tuberosumIzpostavljenost krompirja (Solanum tuberosum L.) biotskemu stresu povzroči spremenjeno izražanje na stres odzivnih genov, preko omogočanja ali zavrtja vezave prepisovalnih dejavnikov na cis-regulatorne elemente. V magistrskem delu smo analizirali promotor gena CPI8, da bi ugotovili, kateri cis-regulatorni element ali kombinacija več teh je ključna za odziv na jasmonsko kislino (JA), ki se tvori ob mehanski poškodbi tkiva in napadu koloradskega hrošča (Leptinotarsa decemlineata). Zaporedje različice tega promotorja iz rastline krompirja genotipa Désirée, pCPI8.De7, smo z verižno reakcijo s polimerazo (PCR) skrajšali na 3’- in 5’-koncu tako, da smo iz njega postopno izločali bioinformatsko predvidene cis-regulatorne elemente, odzivne na JA. Odseke pCPI8.De7 smo vstavili pred kodirajoče zaporedje gena za reporterski protein luciferazo. Nato smo prehodno transformirali rastline krompirja in tobaka (Nicotiana benthamiana Domin) in po tretiranju z JA in dodatku luciferina merili luminiscenco. Ugotovili smo, da krompir ni primeren za primerjavo aktivnosti odsekov pCPI8.De7. Z luciferaznimi testi na rastlinah tobaka smo odkrili ključen odsek pCPI8.De7 za odziv na JA, ki smo ga nato z mutagenim PCR dodatno skrajšali in vanj vnesli točkovne mutacije. Ugotovili smo, da je za odziv na JA najverjetneje ključna kombinacija vezavnih mest za prepisovalna dejavnika VIP1 in NAC078 ter še nepoznanega cis-regulatornega elementa. Te elemente bi lahko uporabili za razvoj gensko zapisanega biosenzorja za JA, kar bi omogočilo boljše razumevanje mehanizmov obrambe na stres pri krompirju.20232023-06-15 08:43:58Magistrsko delo/naloga146845VisID: 217794COBISS_ID: 156794627sl