Priprava in vrednotenje afinitetne kromatografske kolone na osnovi peptidnega liganda za izolacijo imunoglobulinovStrašek, Maša (Avtor) Bratkovič, Tomaž (Mentor) Černigoj, Urh (Komentor) afinitetna kromatografijamonolitCIMpeptidni ligandimunoglobuliniMonoklonska protitelesa predstavljajo eno izmed najpomembnejših in vsestranskih skupin bioloških učinkovin. Za izolacijo in čiščenje terapevtskih protiteles uporabljamo pretežno afinitetno kromatografijo, ki temelji na bakterijskih imunoglobulin-vezavnih proteinih (npr. stafilokoknem proteinu A in streptokoknem proteinu G), a ima le-ta številne pomanjkljivosti. Cilj dela je bil pripraviti in ovrednotiti afinitetno monolitno kromatografsko kolono na osnovi peptidnega liganda za čiščenje in izolacijo imunoglobulinov G (IgG). Pripravili smo afinitetni koloni s stacionarno fazo iz polimetakrilatnega monolita in premrežene agaroze. Na funkcionalizirano površino nosilcev smo prek distančnikov tris(2-aminoetil)amina in bromoacetata imobilizirali peptidni ligand, označen s C-končnim cisteinskim ostankom. S sistemom HPLC smo analizirali dinamično vezavno kapaciteto IgG pripravljenih kromatografskih kolon. Pri agarozni peptidni koloni smo potrdili vezavo IgG, pri monolitni peptidni koloni pa do vezave ni prišlo. Na enako funkcionaliziran monolitni nosilec smo imobilizirali še druge modelne ligande, kot so oligonukleotidi (prek aminske ali tiolne skupine) ter protein A (prek cisteinskega ostanka). Tako pripravljene kromatografske kolone smo primerjali z monolitnimi kolonami z enakim ligandom, a z drugačno funkcionalizacijo. Z določanjem dinamične vezavne kapacitete smo potrdili delovanje vseh. Sklepamo, da hidrofobna narava peptidnega liganda IgG ni kompatibilna s prav tako relativno hidrofobnim polimetakrilatnim monolitnim nosilcem. Domnevamo, da zaradi hidrofobnih interakcij med obema peptidni ligand ni dostopen za vezavo protiteles.20232023-06-03 07:15:03Magistrsko delo/naloga146490VisID: 217758COBISS_ID: 154999299sl