Vloga plektina pri makroavtofagiji v astrocitih glodalcev v celični kulturi pred okužbo z nevrotropnimi flavivirusi in po njej.Tavčar Verdev, Petra (Avtor) Jorgačevski, Jernej (Mentor) avtofagijaplektinastrocitosrednji živčni sistemflavivirusokužbaavtofagosomavtolizosomLC3citoskeletvimentinmikrotubuliaktinfluorescenčna mikroskopijaSIMimunocitokemijaMakroavtofagija je večstopenjski proces za lizosomsko razgradnjo znotrajceličnih komponent, ki vzdržuje celično ravnovesje in omogoča učinkovit odziv celic na stresne razmere. Vloga plektina, ki uravnava organizacijo citoskeleta v sesalskih celicah, je pri poteku makroavtofagije slabo raziskana. Z uporabo plazmida ptfLC3, ki kodira reporterski protein LC3 (označevalec avtofagnih predelkov), in fluorescenčne mikroskopije smo ovrednotili različne parametre makroavtofagije v astrocitih, ki so izražali plektin, in v astrocitih z izbitim genom za plektin. Ugotovili smo, da plektin v astrocitih sodeluje pri pozicioniranju in/ali transportu avtofagnih predelkov, določa velikost avtolizosomov (pozni intermediati avtofagne poti), uravnava potek bazalne makroavtofagije in je nujno potreben za učinkovit avtofagni odgovor v stimuliranih razmerah, kot so stradanje in virusne okužbe. Avtofagija je pogosto tarča virusov, ki jo lahko izkoristijo za virusno razmnoževanje in preživetje v gostiteljskih celicah. Z imunocitokemično detekcijo okuženih celic v celični kulturi astrocitov smo potrdili, da nevrotropni flavivirusi, ki povzročajo okvare v delovanju osrednjega živčnega sistema, okužijo človeške in mišje astrocite. Pokazali smo, da okužba astrocitov, ki vršijo številne homeostazne in metabolne procese v možganih, z izbranimi nevrotropnimi flavivirusi značilno poveča raven astrocitne avtofagije. Pri tem ne pride do okvar v poznih stopnjah avtofagije ali sprememb v velikosti avtofagnih predelkov. Mehanizem delovanja nevrotropnih flavivirusov v astrocitih vključuje prerazporeditev celičnega citoskeleta, saj smo ugotovili, da okužba z virusom klopnega meningoencefalitisa (TBEV) inducira izrazite spremembe v arhitekturi plektinskega, vimentinskega in mikrotubulskega omrežja ter poveča izražanje aktina. Zaključili smo, da je avtofagen odgovor v astrocitih, ki ga sprožijo nevrotropni flavivirusi, odvisen od plektina ter najverjetneje povezan s spremembami v organizaciji vimentinskega omrežja in/ali mikrotubulov.P. Tavčar Verdev]20232023-03-05 07:15:10Doktorsko delo/naloga144638UDK: 578VisID: 217529COBISS_ID: 144149507sl