Predapoptotski celični odziv na stres v primarnih hepatocitihMiller, Izak Patrik (Avtor) Milisav, Irina (Mentor) apoptozaROSprimarni hepatocitipredapoptotski celični odzivkaspaza 9vodikov peroksidHepatociti so visoko specializirane polarizirane jetrne celice, v katerih se vrši večina za jetra specifičnih funkcij. Izolacija primarnih hepatocitov je skupek stresnih dejavnikov, med katerimi izstopa encimska razgradnja medceličnih stikov. Zaradi stresa ob izolaciji se v primarnih podganjih hepatocitih pojavi reverzibilna stresna prilagoditev, imenovana predapoptotski celični odziv na stres (PACOS), ki preko inaktivacije kaspaze 9 onemogoči proženje apoptoze po mitohondrijski poti ter nastopi takoj po izolaciji in izzveni do 6. dne v kulturi. Namen našega dela je bil proučiti PACOS ter njegov vpliv na delovanje hepatocitov in na odziv hepatocitov na dodatni stresni dejavnik (hipoksija in reoksigenacija). Zanimalo nas je tudi, ali so pri proučevanju PACOS sveže tkivne rezine jeter kontrola celičnim kulturam primarnih hepatocitov. V doktorskem delu smo pokazali, da primarni hepatociti v kulturi preživijo ter ohranijo nivo presnovne aktivnosti in sposobnost tvorbe sečnine. Potrdili smo stalno pojavnost PACOS v izoliranih primarnih hepatocitih. Raziskali smo proženje apoptoze v podganjih primarnih hepatocitih in dokazali, da v normalnih pogojih poteče po mitohondrijski poti. Sveže jetrne rezine so glede PACOS lahko kontrola primarnim hepatocitom, saj je v rezinah kaspazo 9 moč učinkovito aktivirati. Prvič smo pokazali, da sta posledici stresa pri izolaciji hepatocitov dva reverzibilna odziva na stres: indukcija endogenega antioksidativnega odziva in PACOS. Oba sproži povečano nastajanje ROS, ki tako omogoči preživetje in normalno delovanje celic. Poleg tega smo pokazali, da so na stres prilagojeni primarni hepatociti manj občutljivi na proženje apoptoze po hipoksiji/reoksigenaciji kot hepatociti pozne kulture, pri katerih sta PACOS in antioksidativni odziv izzvenela. Primarni hepatociti so relevanten in z nekaterimi omejitvami ustrezen model za temeljno proučevanje detoksikacije, metabolizma in potencialnih terapevtikov. Na podlagi rezultatov naše raziskave poudarjamo, da se na stres prilagojeni hepatociti na dodatne stresne dejavnike odzivajo drugače kot hepatociti in vitro ter in vivo, v katerih stresnih odzivov ni. Razumevanje mehanizmov ROS in odzivov na stres v primarnih hepatocitih je ključnega pomena za načrtovanje raziskav, za interpretacijo rezultatov, za prenos izsledkov na razmere in vivo in v končni fazi za razumevanje fiziologije in patofiziologije jeter ter oblikovanje posegov za preprečevanje in zdravljenje jetrne patologije.20232023-01-22 07:15:04Doktorsko delo/naloga143948VisID: 23089COBISS_ID: 146613251sl