Priprava sintetičnih enodomenskih protiteles in njihovo označevanje z encimom sortaza AHribar, Urban (Avtor) Turk, Boris (Mentor) Sybodymolekularna vizualizacija tumorskega mikrookoljaCyanine 5.5označevanje N-koncasortaza Akatepsin BSintetična enodomenska protitelesa (sybody-ji) so majhna enodomenska protitelesa, ki temeljijo na strukturi variabilnih regij kameloidnih protiteles s samo težko verigo (nanotelo). Z in vitro selekcijo lahko ustvarimo sybody-je proti poljubnim proteinom, dobra potencialna tarča zanje je katepsin B (KatB). Ta je prisoten v visokih koncentracijah v mikrookolju večih različnih rakov, kar pomeni, da bi se sybody-ji proti KatB lahko uporabili za vizualizacijo tumorjev. Zaradi nizke molske mase bi molekularne sonde na osnovi sybody-jev imele hiter očistek in posledično nižji signal ozadja. Pri magistrskem delu smo sybody »Sy7« proti človeškemu in mišjemu KatB označili s fluorescenčnim barvilom Cyanine 5.5 (Cy5.5), ki emitira v bližnjem infrardečem spektru (NIR). To smo dosegli tako, da smo s pomočjo maleimidne reakcije najprej s Cy5.5 označili peptid CLPETGY. Označeni peptid Cy5.5-CLPETGY smo nato encimsko pripeli na N-konec modificiranega Sy7 s pomočjo rekombinantne sortaze A (SorA). Označen sybody Sy7GGCy5.5 smo izolirali in potrdili, da se še vedno veže na KatB. Pripravo večjih količin Sy7GGCy5.5, potrebnih za nadaljnje raziskave, z uporabljeno metodo na žalost omejuje nizek izkoristek in zamudnost nekaterih korakov, kar pomeni da je potrebna nadaljnja optimizacija postopka.20222022-12-01 13:00:00Magistrsko delo/naloga142906VisID: 21541COBISS_ID: 135290627sl