Vzpostavitev metodologije za vnos in izražanje heterolognega gena v glivi Trichoderma reesei RUT C30Zaharieva, Marija (Avtor) Petrovič, Uroš (Mentor) Magdevska , Vasilka (Komentor) gliveTrichoderma reeseimetabolni inženiringmetoda Gibsonheterologne proteineGFPS pristopom genskega in metabolnega inženiringa lahko modificiramo naravni metabolizem organizma, da le-ta producira večjo količino želenega produkta ali da omogoča sintezo heterolognega metabolita. Filamentozne glive imajo pomembno vlogo v industrijski biotehnologiji. So privlačni organizmi za produkcijo proteinov, organskih kislin, encimov in sekundarnih metabolitov. Zaradi sposobnosti sinteze in kopičenja visoke koncentracije celulaz je tudi Trichoderma reesei postala pomembna gliva za metabolni inženiring. Visoki donosi so rezultat zelo močnih promotorjev ter učinkovitih signalnih zaporedij, ki ji kodirajo geni za celulaze. Med različnimi molekularnimi pristopi je uporaba poročevalskega gena zelo pomembna pri proučevanju in optimizaciji produkcije proteinov v želenem gostitelju. Z namenom postavitve metodologije za produkcijo heterolognih proteinov v glivi T. reesei RUT C30 smo naredili in uporabili različne konstrukte, ki vsebujejo poročevalski gen za zeleni fluorescenčni protein (GFP). Uspeli smo pridobiti transformante, ki izražajo protein GFP pod kontrolo različnih promotorjev. Produkcija heterolognega proteina GFP je bila večja ob uporabi induktorja Avicel in izražanje gena gfp pod kontrolo promotorja cbh1. Promotor gena cbh1 je močno uravnavan s prisotnostjo določenih virov ogljika. Prisotnost glukoze ga inhibira, medtem ko celuloza in njeni derivati ter laktoza inducirajo izražanje gena pod kontrolo promotorja cbh1. S spektrofotometričnim merjenjem fluorescence, poliakrilamidno elektroforezo v prisotnosti SDS, imunodetekcijo proteina s prenosom western in fluorescenčno mikroskopijo smo uspešno detektirali znotrajcelično izražen protein GFP.20222022-10-27 07:15:04Magistrsko delo/naloga142229VisID: 213889COBISS_ID: 127382275sl