Priprava plazmida z zapisom za citolizin A za zdravljenje raka s cepljenjem in situSamac, Zvezdana (Avtor) Starčič Erjavec, Marjanca (Mentor) Kamenšek, Urška (Komentor) plazmidicitolizin Azdravljenje raka z in situ cepljenjemtehnologija ORTcitotoksičnostCilj imunoterapije proti raku je sprožiti trajen protitumorski imunski odziv, medtem ko normalne gostiteljske celice ostanejo nepoškodovane. Eden od imunoloških pristopov k zdravljenju raka je in situ cepljenje. Pri tem pristopu zvišamo količino in vidljivost tumorskih antigenov (TA) z uporabo terapij, za katere je znano, da sprožijo imunogeno celično smrt. Ta pa lahko privede do nastanka specifičnega imunskega odziva proti sproščenim TA. Za in situ cepljenje so toksini, ki tvorijo pore in povzročajo lizo celic, še posebej privlačni, saj lahko sprostijo TA. V to skupino toksinov uvrščamo tudi citolizin A (ClyA). Da bi raziskali uporabo ClyA za zdravljenje raka z in situ cepljenjem, smo pripravili dva plazmida z zapisom za clyA, pORF-ClyAhsp in pORF-ClyAhsp-Xmark. Slednjega smo uporabili za pripravo plazmida pORF-ClyAhsp-ORT, ki nima gena za odpornost proti antibiotiku in tako zagotovili varnost v skladu s standardi regulatornih agencij. Preverili in potrdili smo ohranjanje pripravljenih plazmidov v bakterijskih sevih Escherichia coli JM109 in DH1-ORT. Zanimalo nas je tudi, ali je pripravljen pORF-ClyAhsp-ORT funkcionalen in se ClyA po transfekciji izraža v evkariontskih celicah. Dobljene rezultate smo primerjali s transfekcijo celične linije B16-F10 s plazmidom pEGFP-N1. Glede na dobljene rezultate bi bilo smiselno v prihodnje opraviti še več raziskav, da bi lahko z gotovostjo trdili, da je ClyA, ki nastane na podlagi kloniranega gena v uporabljenih plazmidih, citotoksičen in tako uporaben za zdravljenje raka z in situ cepljenjem.[Z. Samac ]20222022-10-19 07:15:08Magistrsko delo/naloga142062UDK: 616-006VisID: 213846COBISS_ID: 127251971sl