Meritve citosolne koncentracije cAMP in L-laktata v podganjih astrocitih in celicah 3T3 v kulturiDolanc, Dorian (Avtor) Zorec, Robert (Mentor) Chowdhury, Helena (Komentor) Astrociticelice 3T3laktatcAMPGPCRGPR27FRETZ G-proteini sklopljeni receptorji (GPCR) so transmembranski proteini med katere spada več kot 800 receptorjev. Pri ljudeh je ena tretjina le-teh tarča odobrenih zdravil. V tem delu smo raziskali GPRB, GPCR sirota, ki spada v družino super ohranjenih receptorjev, izraženih v možganih, z neznano funkcijo. Citosolne ravni L-laktata, končnega produkta aerobne glikolize, smo merili z nanosenzorjem Laconic, ki temelji na metodi FRET. V posameznih embrionalnih celicah divjega tipa (WT) 3T3 je uporaba agonistov Smart009 in Smart075, ter molekule 8535 (1 µM), nadomestnega agonista, za katerega je znano, da aktivira GPRB, povzročila povečanje koncentracije L-laktata. Podobno povečanje je bilo zabeleženo v primarnih astrocitih podgan, nevroglialnih celic, ki vsebujejo glikogen in izražajo encime aerobne glikolize. Pri celicah 3T3, ki niso izražale GPRB (3T3KOB), je bilo povečanje L-laktata, ki ga povzročata agonista Smart009 in 8535, zmanjšano v primerjavi s kontrolami WT. V celicah 3T3KOB smo povečanje L-laktata po stimulaciji ponovno vzpostavili s pomočjo plazmida, ki nosi GPRB. Ti rezultati kažejo, da stimulacija GPR27 poveča aerobno glikolizo in proizvodnjo L-laktata v celicah 3T3 in astrocitih. Spremljali smo tudi podcelično dinamiko L-laktata in cAMP in ugotovili, da stimulacija z agonisti za GPCR izzove prostorsko heterogene spremembe v znotrajcelični porazdelitvi L-laktata in cAMP.[D. Dolanc]20222022-10-16 07:15:27Doktorsko delo/naloga142018UDK: 576VisID: 213837COBISS_ID: 127010307sl