Vpliv zaznavanja kvoruma na sintezo bacilena pri bakteriji Bacillus subtilisBizjak Ternik, Nastja (Avtor) Danevčič, Tjaša (Mentor) Bacillus subtiliszaznavanje kvorumabacilensekundarni metabolitikonfokalna fluorescenčna mikroskopijaizražanje genovBakterije Bacillus subtilis sintetizirajo več različnih sekundarnih metabolitov, med katerimi je tudi bacilen. Sinteza nekaterih sekundarnih metabolitov je uravnavana s sistemom za zaznavanje kvoruma (QS). Da bi preverili, ali je tudi sinteza bacilena uravnavana s QS, smo pripravili seve z okvarami v sistemu QS ter poročevalsko fuzijo promotorja PpksC z zapisom za rumeni fluorescenčni protein (yfp). Metode so zajemale spremljanje intenzitete fluorescence s fluorescenčnim mikročitalcem na nivoju celotne populacije in s konfokalnim fluorescenčnim mikroskopom (CLSM) na nivoju posamezne celice. Metodi nam podata različne rezultate, saj nam mikroskopija ponudi dodaten vpogled na nivo posamezne celice. Pri sevu B. subtilis PS-216 na nivoju celotne populacije lahko potrdimo, da na izražanje bacilena vpliva sistem QS, kar ne moremo reči za sev B. subtilis NCIB3610. Seva PS-216 in NCIB3610 se razlikujeta v izražanju genov za sintezo bacilena, kar lahko potrdimo tako na nivoju posamezne celice, kot tudi na nivoju celotne populacije. Z metodo CLSM smo ugotovili, da se pri vseh sevih pojavita dve podpopulaciji – prva – številčnejša z nižjim nivojem sinteze bacilena in druga – manj številčna z višjim nivojem sinteze bacilena. Poleg tega opazimo razlike v izražanju bacilena med rastjo v različnih časovnih točkah. Med sevi PS-216 divjega tipa in sevi z okvarami v sistemu QS so prisotne minimalne razlike v izražanju genov za sintezo bacilena, medtem ko pri sevih NCIB3610 statistično značilnih razlik ni. Rezultati pri uporabi metode CLSM niso bili ponovljivi, zato bi v nadaljevanju hipoteze lahko preverili z drugimi neodvisnimi metodami (na primer pretočno citometrijo), ki bi nam z večjo gotovostjo potrdile ali ovrgle zastavljene hipoteze.[N. Bizjak Ternik]20222022-10-01 07:16:07Magistrsko delo/naloga141540UDK: 579.22/.26:579.852.11VisID: 213445COBISS_ID: 124024835sl