Opredelitev lastnosti delovanja nekaterih mutant Nep1-podobnega proteina iz oomicete Pythium aphanidermatumRadešić, Matea (Avtor) Skočaj, Matej (Mentor) Anderluh, Gregor (Komentor) proteini NLPfitopatogeni mikroorganizmiinterakcija protein-lipidfluorimetrijaProteini, podobni Nep1 ali NLP (ang. (Nep-1)-like protein) so posebna družina proteinov, ki se pojavlja pri fitopatogenih bakterijah, glivah in oomicetah. Delujejo kot elicitorji rastlinskega imunskega sistema ter imajo citotoksično delovanje na rastlinske celice. Prvi koraki interakcije proteinov NLP s plazemsko membrano so znani, vemo pa tudi, da se NLP vežejo na sfingolipid glikozil inozitol fosforilceramid (GIPC), ki je gradnik rastlinske plazemske membrane. Nedavno je prišlo do razjasnitve mehanizma delovanja proteinov NLP: po vezavi proteina na sfingolipidni receptor pride do prerazporeditve receptorjev in nastanka majhnih por v membrani, kar posledično vodi v smrt celic in nekrozo tkiv. V nalogi smo želeli opredeliti nekatere lastnosti cisteinskih mutant proteina NLPPya iz oomicete Pythium aphanidermatum. Cisteinske mutante so locirane na C-terminalnem koncu proteina, in sicer na α-vijačnici, z namenom vezave fluorescenčne sonde na mutirano tiolno skupino. Fluorescenčna sonda IANBD amid omogoča razumevanje sprememb okolja, ki se zgodijo pri interakciji proteina z modelno membrano, ki vsebuje GIPC. S testom infiltracije mutant v liste tobaka, merjenjem sproščanja ionov iz infiltriranega območja in testom kosedimentacije z multilamelarnimi vezikli z GIPC, smo preverili ohranjenost citotoksične aktivnosti mutant glede na divji tip proteina. Uvedba dotičnih mutacij ne vpliva na zvitje proteina, saj imajo mutante podobno temperaturo tališča kot divji tip. Fluorimetrične meritve kažejo na stik fluorescenčnega označevalca s hidrofobnim območjem, kar pomeni da C-terminalni del proteina interagira z membrano.[M. Radešić]20222022-09-16 07:17:19Magistrsko delo/naloga140579UDK: 577.112+577.2:582.282.23VisID: 210925COBISS_ID: 122006531sl