Vpliv dodatka kofaktorja na aktivnost amin transaminaze imobilizirane v obliki zamreženih encimskih agregatovHlebanja, Patrik (Avtor) Žnidaršič Plazl, Polona (Mentor) CLEAamin transaminazapiridoksal-5'-fosfatmikroreaktorbiokatalizaBiokataliza igra pomembno vlogo v prehodu k trajnostnim načinom proizvodnje. Amin transaminaze (ATA) omogočajo učinkovito stereoselektivno proizvodnjo aminov in so zato dobra alternativa kemijski sintezi pri pridobivanju optično čistih spojin. Implementacijo ATA v industrijsko proizvodnjo ovira slaba stabilnost encimov, nizka zadržana aktivnost po imobilizaciji ter potreba po eksogeno dodanem kofaktorju piridoksal-5'-fosfatu (PLP). V zadnjih letih je proteinski inženiring omogočil izražanje izjemno stabilnih amin transaminaz z visoko afiniteto za kofaktor. Poleg tega priprava zamreženih encimskih agregatov (CLEA) proizvedenih v mikropretočnih sistemih in njihova uporaba v mikroreaktorjih ponujata obetaven način za dolgotrajno uporabo encimov v kontinuirnih biokatalitskih procesih. V pričujočem delu smo raziskali vpliv eksogenega dodatka kofaktorja PLP na zadržano aktivnost in stabilnost CLEA delcev proizvedenih z izbrano ATA. Encimskim agregatom pripravljenim z mikropretočno napravo smo določali velikost na osnovi merjenja dinamičnega sipanja svetlobe in elektronskega mikroskopiranja. Raziskali smo aktivnost in stabilnost pripravljenih CLEA delcev v kontinuirnem biokatalitskem procesu v membranskem mikroreaktorju z in brez eksogenega PLP v napajalnem toku. Rezultati kažejo na visoko afiniteto izbrane amin transaminaze za kofaktor PLP in visoke zadržane aktivnosti CLEA delcev tega encima tudi v odsotnosti eksogeno dodanega kofaktorja. To smo potrdili tudi v procesu izvedenem v membranskem mikroreaktorju z imobiliziranimi CLEA delci, kjer ni bilo bistvenih razlik v konverziji reaktanta na izhodu iz mikroreaktorja, ko je ta obratoval s PLP ali brez njega v napajalnem toku. Priprava CLEA delcev v mikropretočnem sistemu se je izkazala kot zanesljiva in učinkovita metoda za imobilizacijo ter implementacijo ATA v industrijski biokatalizi.20222022-09-09 12:40:00Diplomsko delo/naloga140014VisID: 21784COBISS_ID: 129822467sl