Razporeditev mehanoreceptorjev PIEZO1 in PIEZO2 v uroteliju sečnega mehurjaStrniša, Gregor (Avtor) Romih, Rok (Mentor) sečni mehururotelijPIEZOprenos westernimunofluorescencaZaznavanje mehanskih dražljajev, ki jih povzroča raztezanje sečnega mehurja ob polnjenju z urinom, je pomembno za pravilno delovanje sečil med miksijskimi ciklusi. Pri tem so ključni mehanoreceptorji v uroteliju sečnega mehurja. Nedavne raziskave so pokazale, da celice urotelija izražajo številne mehanoreceptorje, med njimi tudi ionska kanala PIEZO1 in PIEZO2. Njuna razporeditev v uroteliju pa do danes še ni bila pokazana. Izražanje PIEZO1 in PIEZO2 v steni sečnega mehurja smo preverjali s prenosom western, njuno lokalizacijo v različnih skladih urotelija in različnih področjih mišjega sečnega mehurja pa smo proučevali z imunofluorescenco. Izbiro protiteles, ki prepoznavajo različne epitope proteinov PIEZO, smo opravili po analizi aminokislinskih zaporedij. Izražanje PIEZO1 smo dokazali z enim od treh preizkušanih protiteles, medtem ko nobeno protitelo proti PIEZO2 ni pokazalo lis na ustrezni molekulsku masi. Na zamrznjenih rezinah so bile reakcije za PIEZO1 pozitivne v bazalnih, intermediarnih in površinskih dežnikastih celicah z dvema protitelesoma. V dežnikastih celicah je bila reakcija prisotna na apikalni plazmalemi. Podobno razporeditev kaže tudi eno protitelo proti PIEZO2, pri čimer značilne označenosti apikalne plazmaleme ni mogoče zaznati. Razlik v razporeditvi obeh PIEZO nismo opazili niti na rezinah iz različnih predelov sečnega mehurja, niti pri analizi urotelija s konfokalnim mikroskopom. Z uporabo več protiteles in različnih imunohistokemijskih metod smo dokazali prisotnost mehanoreceptorjev PIEZO v bazalnem, vmesnem in površinskem skladu urotelija vseh predelov normalnega sečnega mehurja miši. S tem smo postavili temelje za študij mehanosenzorne vloge proteinov PIEZO pri boleznih sečnega mehurja, ki povzročajo nepravilnosti v mikcijskem ciklusu.20222022-09-08 14:15:00Diplomsko delo/naloga139930VisID: 22153COBISS_ID: 128400643sl