Primerjava lastnosti različnih vrst luciferaz iz kresničk v celičnih, in vitro in in vivo študijahLavrih, Ernestina (Avtor) Turk, Boris (Mentor) kresničkina luciferazaD-luciferinbioluminiscencabioluminiscenčno slikanjebiomedicinska uporabacelična linija 4T1rak dojkeBioluminiscenca je oddajanje svetlobe pri živem organizmu in se je tekom evolucije ohranila predvsem pri morskih organizmih in nekaterih vrstah kopenskih žuželk, bakterij in gliv. Gre za encimsko reakcijo, kjer encim luciferaza katalizira oksidacijo luciferina v oksiluciferin. Ta med prehodom iz vzbujenega v osnovno energetsko stanje odda fotone. Za proces bioluminiscenčne reakcije encim porablja substrat luciferin, kofaktorja adenozin trifosfat in kovinski ion (tipično Mg2+) ter kisik. Na podlagi te encimske reakcije in kresničkine luciferaze je bila razvita metodologija bioluminiscenčnega slikanja (BLI), ki je primerna za analitično spremljanje širokega spektra bioloških procesov in vitro ter in vivo. V delu smo primerjali odvisnost emisije svetlobe od fizikalno-kemijskih parametrov in določili koncentracije kofaktorjev in druge fizikalno-kemijske pogoje za optimalizacijo uporabe bioluminiscenčne reakcije in vitro. Ugotovitve smo preverili v celičnih testih na trojno negativni mišji celični liniji raka dojke 4T1 iz mišjega seva BALB/c, ki izraža luciferazo. V končnem delu smo spremljali bioluminiscenčno reakcijo in vivo na modelu raka dojke 4T1 na mišjem sevu BALB/c. Optične meritve tumorjev, ki smo jih pridobili z bioluminiscenčnim slikanjem, smo primerjali z ročnim merjenjem, ki smoga izvedli z digitalnim kljunastim merilom. Namen tega dela je bila optimizacija eksperimentalnih pogojev za uporabo luciferaz v kasnejših in vitro ter in vivo biomedicinskih raziskavah in razvoju novih zdravil, terapij ter diagnostičnih metod.20222022-09-08 12:30:00Magistrsko delo/naloga139921VisID: 21962COBISS_ID: 128769283sl