Fizikalna optimizacija procesov čiščenja bioloških zdravilLah, Maša (Avtor) Ravnik, Miha (Mentor) Zidar, Mitja (Komentor) fizikalna optimizacijaagregacijagelska izključitvena kromatografijaintrinzična proteinska fluorescencakoloidna stabilnostkonformacijska stabilnostmonoklonska protitelesaproteiniDelo obravnava fizikalno optimizacijo pogojev za čiščenje proteinov in povezanih metod za iskanje optimalnih pogojev za minimizacijo agregacije. Metodološko delo temelji na kombinaciji eksperimentov in modelske analize eksperimentov, pri čemer sta glavni uporabljeni eksperimentalni metodi gelska izključitvena kromatografija in intrinzična triptofanska fluorescenca. Pripravili smo več formulacij z različnimi monoklonskimi protitelesi pri različnih pH, ionskih močeh in proteinskih koncentracijah. Z meritvijo triptofanske fluorescence smo opredelili vpliv posameznih dejavnikov na konformacijsko stabilnost proteinov v formulacijah. Opazili smo temeljne razlike v obnašanju monoklonskih teles, ki kažejo na različne mehanizme denaturacije in agregacije. Z gelsko izključitveno kromatografijo smo določili delež agregatov v formulacijah po izpostavljenosti nizkemu pH. S kombinacijo meritev smo sklepali o mehanizmih agregacije monoklonskih protiteles in o vlogi konformacijske stabilnosti v začetnih korakih agregacije. Ugotovili smo, da premik k višjim valovnim dolžinam izsevane svetlobe ob izpostavljenosti nizkemu pH kaže na ireverzibilno, k nižjim pa na reverzibilno agregacijo proteinov v formulacijah. Delo je prispevek k izboljšanju procesa čiščenja terapevtskih proteinov, ki je nujen za proizvajanje pacientu varnih zdravil.20222022-09-07 08:15:12Magistrsko delo/naloga139744VisID: 125560COBISS_ID: 120526851sl