Priprava nanopor bakterijskega citolizinaSpruk, Gregor (Avtor) Anderluh, Gregor (Mentor) nanoporemembranezaznavanje z nanoporamiperfringolizin OZaznavanje z nanoporami (angl. nanopore sensing) je analitska metoda, ki omogoča detekcijo posameznih molekul na podlagi sprememb v ionskem toku, ki teče skozi poro. Zaradi vedno večjega nabora kompleksnejših analitov pa se povečujejo potrebe po novih porah s specifičnimi lastnostmi. V magistrski nalogi smo želeli pripraviti homogene pore perfringolizina O (PFO) za uporabo v zaznavanju z nanoporami. V ta namen smo z uporabo SDS-AGE (angl. sodium dodecyl sulphate agarose gel electrophoresis) analizirali vpliv pogojev priprave na velikost, homogenost in končno koncentracijo PFO oligomerov, ki smo jih pripravili na velikih enoslojnih veziklih in jih s teh sprostili z uporabo različnih detergentov. Nato smo za nadaljnjo analizo na planarnih lipidnih membranah in s krio transmisijskim elektronskim mikroskopom vzorce tako pripravljenih por s pomočjo ionsko-izmenjevalne kromatografije, SDS-AGE in gelske izključitvene kromatografije očistili ostankov priprave por in obenem poskusili ločiti pore po obliki in velikosti. Sestava veziklov se je izkazala kot ključna za optimalno pripravo PFO por in je morala zagotavljati, da je dovoljšna količina holesterola izpostavljena na površini membrane ter tako dostopna za vezavo PFO monomerov. Hkrati pa se je potrebno izogniti kombinacijam lipidov, ki s PFO oligomeri tvorijo agregate, po tem ko se vezikle raztopi z detergentom. Ostali pogoji priprave niso imeli vpliva na pripravo por ali pa so povzročili agregacijo oligomerov z lipidi po dodatku detergenta. S prej navedenimi metodami nam je uspelo očistiti vzorce pripravljenih por, ni pa nam uspelo doseči ločbe por po velikosti in obliki. Ker se očiščene pore niso vstavljale v lipidne dvosloje, jim na planarnih lipidnih membranah nismo uspeli opredeliti lastnosti.[G. Spruk]20222022-08-31 07:16:46Magistrsko delo/naloga139107UDK: 577.2VisID: 208222COBISS_ID: 120417283sl