Določanje antigensko-specifičnega imunskega odziva CD8+ citotoksičnih limfocitov T z uporabo tehnike ELISPOTZajc, Kaja (Avtor) Švajger, Urban (Mentor) ELISPOTIFN-γbiologijadendritične celicelimfociti TmelanomMetoda ELISPOT (angl. Enzyme-Linked ImmunoSpot) se zaradi preproste izvedbe in visoke občutljivosti pogosto uporablja v diagnostiki in raziskavah na različnih področjih. Test interferon (IFN)-γ ELISPOT omogoča štetje antigensko (Ag)-specifičnih limfocitov T po Ag-specifični stimulaciji. Glavni namen magistrskega dela je bil vzpostaviti test na osnovi metode ELISPOT za določanje Ag-specifičnega imunskega odziva CD8+ citotoksičnih limfocitov T (CTL). Iz levkocitnih pripravkov zdravih krvodajalcev smo izolirali enojedrne celice periferne krvi (PBMC), ki smo jih uporabili za različne poskuse. Izvedli smo metodo mešane levkocitne reakcije (MLR), PBMC ex vivo stimulirali z različnimi peptidnimi mešanicami ali iz PBMC z imunomagnetno selekcijo izolirali celokupne CD8+ limfocite T in monocite. Slednje smo diferencirali v dendritične celice (DC), ki smo jih nadalje uporabili za in vitro stimulacijo avtolognih CD8+ CTL. Na podlagi rezultatov optimizacije metode ELISPOT smo določali Ag-specifičnost limfocitov T. Pokazali smo, da lahko z metodo ELISPOT zaznamo alo-Ag-specifične limfocite T in virusno-specifične limfocite T v populaciji PBMC po 24-urni ex vivo stimulaciji z mešanico peptidov citomegalovirusa (CMV), virusa Eppstein-Barr in virusa gripe A (CEF) ter mešanico peptidov CMV fosfoproteina 65 (pp65). Dokazali smo tudi, da lahko z metodo ELISPOT zaznamo redke klone melanomsko-specifičnih CD8+ CTL po in vitro stimulaciji z zrelimi avtolognimi DC (αDC in zDC), pulziranimi s peptidi, značilnimi za melanom, gp100, Melan-A in tyr. V sklopu in vitro stimulacije CD8+ CTL z DC smo dokazali tudi, da imajo zrele zDC ojačano sposobnost prožitve melanomsko-specifičnega imunskega odziva CTL v primerjavi z αDC.[K. Zajc]20222022-07-14 07:15:32Magistrsko delo/naloga138288UDK: 576VisID: 204744COBISS_ID: 115668227sl