Funkcijske analize proteinov NLPTarman, David (Avtor) Anderluh, Gregor (Mentor) biotehnologijaporotvorni proteinprotein NLPfunkcijska analizaZaradi potencialne vloge v razvoju inhibitorjev in herbicidov je zelo pomembna razjasnitev zgradbe in molekularnega mehanizma delovanja Nep1-podobnih proteinov (NLP). Z namenom preverjanja funkcije C-terminalnega α-heliksa pri vezavni sposobnosti modelnega NLP proteina oomicete Pythium aphanidermatum (NLPPya) smo pripravili mutante; Phe211Ala, Phe212Ala, Phe211,212Ala, Asn194Ala in Asn196Ala. Analiza termperaturne stabilnosti z diferenčno dinamično fluorimetrijo in cirkularnim dikroizmom je pokazala nižje vrednosti talilne temperature pri mutantih, kar kaže na njihovo znižano termperaturno. Metodi sta poleg tega pokazali večjo izpostavljenosti hidrofobnih površin v nativnem stanju, razlike v nativnem spektru, kot tudi razlike v številu in intenziteti prevojev spektra v primerjavi z NLPPya. Rezultati torej nakazujejo na spremembe v zvitju mutantov. Analiza vezave s sedimentacijskimi testi je pokazala višjo sposobnost mutantov za vezavo na vezikle, sestavljene iz palmitoil-oleoil fosfatidilholina, glikozilinozitol fosfoceramida (GIPC) in rastlinskih sterolov v molarnem razmerju 3 : 4 : 3. Vendar so se mutanti vezali tudi na kontrolne vezikle brez tarčnih lipidov GIPC, kar pomeni, da je vezava nespecifična. Čeprav je specifična vezava na GIPC pri mutantih in NLPPya primerljiva, so testi toksičnosti pokazali višjo toksičnost pri NLPPya. Razlike v aminokislinskem zaporedju in posledične razlike v zvitju torej zmanjšajo količino poškodb membrane, ki jo povzročijo mutanti.[D. Tarman]20222022-07-12 14:28:57Magistrsko delo/naloga138155UDK: 601.4:577.21:606:631.528:577.27(043.2)VisID: 204735COBISS_ID: 115121411sl