Vpliv proteinov gp6 in gp7 na aktivnost promotorjev P1 in P2 bakteriofaga GIL01Gobec, Ana Felicita (Avtor) Butala, Matej (Mentor) bakteriofagibakteriofag GIL01Bacillus thuringiensisproteiniprotein LexAodziv SOSfagni protein gp7represor litičnega ciklaBakteriofag GIL01 je temperirani fag iz virusne družine Tectiviridae, ki okužuje bakterijo Bacillus thuringiensis. Medtem, ko večina temperiranih bakteriofagov, ki v aktivni litični cikel vstopijo ob poškodbah DNA, uporablja svoj represor za vzdrževanje dormantnega lizogenega cikla, GIL01 za ta namen izkorišča bakterijski represor LexA. LexA je glavni regulator bakterijskega odziva SOS, ki se vklopi ob poškodbah DNA in celici omogoči njeno popravilo. GIL01 nosi zapis za več majhnih proteinov s predvideno regulatorno funkcijo. V tej nalogi smo se osredotočili na proteina gp6 in gp7. Protein gp6 je homolog domene, ki se nahaja na aminskem koncu proteina LexA. Protein gp6 ob vezavi na promotorsko regijo P3 omogoči prepis poznih genov faga GIL01 in aktivacijo litičnega cikla. Protein gp7 tvori kompleks z bakterijskim represorjem LexA in ojača njegovo vezavo na tarčna zaporedja DNA. Cilj magistrskega dela je bil preučiti vpliv proteinov gp6 in gp7 na promotorsko regijo P1-P2 bakteriofaga GIL01, ki nadzoruje izražanje zgodnjih genov. Z analizami promotorske aktivnosti smo dokazali, da gp6 ne aktivira prepisa iz promotorske regije P1-P2. Potrdili smo, da protein gp7 deluje kot ko-represor in kot izoliran rekombinantni protein sam ne vstopa prosto v bakterijsko celico. Rezultati nakazujejo da je za aktivacijo samostojne promotorske regije P1 potreben dodatni bakteriofagni faktor. Da bi bolje okarakterizirali vezavo med LexA in gp7, smo pripravili plazmidne konstrukte za sintezo alaninskih mutantov proteina gp7, pri čemer smo posamezno aminokislino nestrukturiranega karboksilnega konca spremenili v alanin. Rezultati drugih raziskovalcev so pokazali, da noben od mutantov ni izgubil zmožnosti interagirati s proteinom LexA.[A. F. Gobec]20222022-07-12 14:22:11Magistrsko delo/naloga138150UDK: 577.21:578.347VisID: 204724COBISS_ID: 115151875sl