Priprava in uporaba zamreženih encimskih agregatov v mikropretočnih sistemihLavrič, Žan (Avtor) Žnidaršič Plazl, Polona (Mentor) biokatalizaimobilizacija encimovmikropretočni sistemiamin transaminazazamreženi encimski agregatiImobilizacija encimov je eden najpogostejših načinov za izboljšanje stabilnosti biokatalizatorjev, ki med drugim omogoča ponovno uporabo teh učinkovitih in okolju prijaznih biokatalizatorjev. V zadnjih dveh desetletjih se je priprava zamreženih encimskih agregatov (angl. cross-linked enzyme aggregates, CLEA) izkazala kot zelo učinkovit, enostaven in cenovno ugoden način imobilizacije. V magistrski nalogi smo razvili postopek priprave zamreženih encimskih agregatov izbrane amin transaminaze (ATA-CLEA) v mikropretočnem sistemu. Povprečen radij delcev je bil 37,13 ± 0,38 nm, kar je bistveno manj kot pri šaržnem postopku, kjer nastanejo delci opazni prostemu očesu. ATA-CLEA delci, pripravljeni v mikropretočni napravi, so izkazali 87,1 % zadržane aktivnosti, kar je po literaturnih podatkih kar 2,4-krat več kot pri CLEA delcih, pridobljenih v šaržnem postopku Poleg tega smo v mikropretočnem sistemu razvili in-situ ločevanje agregatov od raztopine, s čimer smo se izgonili običajnim postopkom, ki v večini primerov vodijo v zlepljenje nastalih delcev in manjšo zadržano aktivnost pripravkov. Namesto centrifugiranja smo nastale delce v mikropretočnem sistemu vodili v pretočni membranski mikroreaktor, v katerem smo lahko enostavno odstranili reagente za njihovo tvorbo, ob enem pa s tem encimski pripravek imobilizirali za nadaljnjo biotransformacijo. Proces z ATA-CLEA delci v membranskem mikroreaktorju je bil bolj učinkovit v primerjavi z neagregiranim encimom. ATA-CLEA delci so tudi bolj stabilni od neagregiranega encima, saj je bila produktivnost membranskega mikroreaktorja z ATA-CLEA delci v šestih dneh kontinuirnega procesa nespremenjena, medtem ko je pri neagregiranem encimu produktivnost v petih dneh padla za 20 %. 20222022-03-21 10:15:01Magistrsko delo/naloga135576VisID: 17521COBISS_ID: 102137347sl