Izolacija in karakterizacija bakteriofagov specifičnih za spekter večkratno odpornih bakterijZupan, Manca (Avtor) Vodovnik, Maša (Mentor) Smrekar, Frenk (Komentor) fagibakteriofagibioprocesiizolacijakarakterizacijafagna terapijaBakteriofagi (fagi) so virusi, ki okužujejo bakterije in tako v sklopu fagne terapije predstavljajo alternativo za boj proti večkatno odpornim bakterijam. V nalogi smo fage izolirali iz vodnih okoljskih vzorcev in odkrili fage specifične za 39 izmed 45 bakterijskih sevov treh bakterijskih vrst E. coli, K. pneumoniae in P. mirabilis. Fage smo na platformi podjeta JAFRAL izolirali v petih dneh. Za vsako izmed treh bakterijskih vrst smo si izbrali fag, ki lizira največ sevov bakterij in ima najvišji titer, in ga nagojili po načelih magistralne priprave fagnih produktov. Postopek priprave fagnih produktov je trajal 19–22 dni. Začeli smo s pomnoževanjem v manjšem obsegu, nato smo fage pomnožili v večjem obsegu, na litrski skali, nadaljevali s filtracijo lizatov gostiteljskih sevov in koncentriranjem s tangencialno pretočno filtracijo. Temu je sledilo odstranjevanje endotoksinov z afinitetno kromatografijo s sistemom Endotrap, na koncu pa smo fagne pripravke še dodatno očistili z metodo gelske izključitvene kromatografije. Postopki pomnoževanja so v večini primerov omogočili pridobivanje zadostnih količin bakteriofagov za klinično uporabo. Faga ZOO1 in P6 sta se izkazala kot potencialno primerna za uporabo v klinični medicini, saj je bila koncentracija fagov v pripravkih zadostna za priporočen dnevni odmerek, vrednosti endotoksinov v produktih pa znotraj kriterijev za zdravljenje okužb večkratno odpornih bakterij pri človeku s parenteralnim vnosom. Fagne pripravke smo tudi okarakterizirali s pregledom morfologije plakov, z ogledom strukturnih značilnosti s transmisijskim elektronskim mikroskopom in bioinformatsko analizo genomov. S slednjo smo potrdili, da gre za litične fage, ki nimajo zapisov za integraze in virulentne dejavnike. Faga ZOO1 in P6 tudi nimata zapisov za odpornosti proti antibiotikom in sta tako tudi s tega vidika primerna za uporabo v fagni terapiji, fag D13 pa za zdravljenje ni primeren, saj njegov genom vsebuje zapis za ß-laktamazo.[M. Zupan]20212021-12-01 07:15:17Magistrsko delo/naloga133561UDK: 602.44:602.3:578.347VisID: 202903COBISS_ID: 87123715sl