Biokemijska in biofizikalna karakterizacija aktinoporinom podobnega porotvornega proteina iz morskega polža Conus andremenezi.Fajdiga, Lija (Avtor) Podobnik, Marjetka (Mentor) biotehnologijaporotvorni proteinaktinoporinom podobni proteinAktinoporini (AP) so α-porotvorni proteini, prisotni v strupu morskih ožigalkarjev. Ob stiku s tarčno membrano topne monomerne oblike teh proteinov oligomerizirajo in po konformacijski spremembi protomerov predrejo membrano, da nastane transmembranska pora. Tipični predstavniki AP se specifično vežejo na sfingomielin, prisoten v celičnih membranah, in ne vsebujejo cisteinskih aminokislinskih ostankov. Zaradi svojih lastnosti so vse bolj zanimivi za mnoge aplikacije, predvsem s področja biotehnologije in medicine. Ker je pri razvoju aplikacij ključnega pomena širok nabor porotvornih proteinov z različnimi lastnostmi, je poleg genskega ali proteinskega inženiringa izjemnega pomena tudi odkrivanje in določanje lastnosti novih AP in aktinoporinom podobnih proteinov (ALP). Protein CAND iz morskega polža Conus andremenezi, ki je bil v sklopu naloge prvič rekombinantno izražen in eksperimentalno okarakteriziran, je eden od predstavnikov ALP. V njegovi primarni zgradbi so prisotna značilna aminokislinska zaporedja AP. Napoved elementov sekundarne strukture prav tako kaže na visoko podobnost z AP. Za CAND smo z merjenjem spektra cirkularnega dikroizma določili temperaturo taljenja približno 41 °C, nanjo pa pozitivno vpliva višja koncentracija soli in nižje pH vrednosti pufra. pH ima tudi močan vpliv na hemolitično aktivnost proteina CAND, ki pa je pri nižjem pH nižja, v splošnem pa je aktivnost CAND nekaj velikostnih razredov nižja od aktivnosti FraC. Kot nekateri predstavniki ALP, ki so bili do sedaj že eksperimentalno okarakterizirani, tudi CAND ne kaže specifičnosti za sfingomielin, saj se veže tudi na druge lipide v membranah. Porotvorno aktivnost proteina CAND smo tudi pokazali s posnetkom pore proteina CAND na velikih unilamelarnih veziklih (LUV) z uporabo krio-elektronske mikroskopije. Izolacijo pore iz veziklov pa smo izvedli z raztapljanjem LUV z dodatkom detergenta DDM in ločevanjem na velikostno izključitveni kromatografski koloni.[L. Fajdiga]20212021-10-01 10:21:34Magistrsko delo/naloga131705UDK: 577.112:594.3(043.2)VisID: 199325COBISS_ID: 78990083sl