Izbris daljšega genomskega odseka bakterije Streptomyces rimosus z uporabo CRISPR-Cas9Godec, Tim (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) CRISPRdelecijaredukcija genomaStreptomyces rimosusRazvoj celičnih tovarn na osnovi bakterij iz rodu Streptomyces je ključen za proizvodnjo novih in že poznanih biološko aktivnih učinkovin. S postopno delecijo večjih delov genoma lahko razvijemo učinkovito platformo za heterologno izražanje sekundarnih metabolitov. Klasične metode za manipulacije genoma v streptomicetah so zahtevne in časovno potratne. V tem delu, smo z uporabo CRISPR-Cas9 sistema izvedli delecijo genoma bakterije Streptomyces rimosus v velikosti 145 kb. Z bioinformacijsko analizo smo izbrali tarčno regijo genoma, ustrezne homologne regije in vodilne RNA. Z metodama PCR s prekrivanjem in SLiCE kloniranje smo sestavili plazmidni konstrukt za delecijo s CRISPR-Cas9. Konstrukt smo s konjugacijo vnesli v S. rimosus in testirali delecijo v pozitivnih klonih z metodo PCR in sekvenciranjem. Identificirali smo številne seve s pravilno delecijo izbranega fragmenta DNK v velikosti 145 kb.[T. Godec]20212021-09-15 07:15:34Magistrsko delo/naloga130412UDK: 602.3:579.873.7:602.6:579.8(043.2)VisID: 196299COBISS_ID: 76574723sl