Priprava konstruktov za izražanje rekombinantnega zunajceličnega dela človeškega proteina EGFR v sesalskih celičnih linijah.Vegelj, Nika (Avtor) Lenarčič, Brigita (Mentor) EGFRrastni faktorsesalske celiceProtein EGFR je transmembranski glikoprotein, ki spada v skupino tirozin kinaznih receptorjev in ima pomembno vlogo pri proliferaciji, diferenciaciji ter signalizaciji celice. Velik vpliv pri pravilni signalizaciji proteina EGFR imajo post-translacijske modifikacije, predvsem pravilna glikozilacija. Da bi okarakterizirali vpliv glikozilacije EGFR na vezavo liganda EpEX, smo protein EGFR izrazili v sesalskih celičnih linijah z uporabo sistema Flp-In, ki omogoči, da se željeni gen vključi na točno določeno mesto v genomu. Pripravili smo 4 različne zapise za zunajcelični del EGFR (EGFR-Ex) in sicer z nativnim signalnim peptidom z in brez elementa WPRE ter z albuminskim signalnim peptidom z in brez elementa WPRE. S tem smo želeli preveriti vpliv albuminskega signalnega peptida ter elementa WPRE na nivo izražanja EGFR-Ex, saj naj bi oba prispevala k povišanemu izražanju rekombinantih priteinov. Transfekcijo smo izvedli v celicah Flp-In™-CHO in Flp-In™-293. Izražanje proteina EGFR smo s prenosom western ter imunodetekcijo potrdili pri vseh štirih konstruktih v celicah HEK, kjer je izražanje potekalo prehodno. Pri celicah CHO, kjer je potekalo stabilno izražanje vseh štirih konstruktov, pa smo uspeli potrditi le izražanje konstrukta z nativnim signalnim peptid ter elementom WPRE v samem vektorju. Kvantitativne analize vpliva albuminskega signalnega peptida in elementa WPRE na nivo izražanja EGFR-EX nam žal ni uspelo izvesti.20212021-09-08 14:50:00Diplomsko delo/naloga129829VisID: 18061COBISS_ID: 80163587sl