Optimizacija metodologije za proučevanje aktivnosti promotorjev v krompirjuKobe, Nina (Avtor) Gruden, Kristina (Mentor) Dolinar, Marko (Komentor) genetsko kodiran biosenzor rastlinskega imunskega odzivaluciferazni test aktivnosti promotorjevsalicilna kislinaizolacija protoplastov krompirjaBiotski stres v rastlinah sproži obrambni odgovor. V uravnavanje slednjega so vključene signalizacijske poti s fitohormoni, med katerimi so najpomembnejši salicilna kislina (SA), jasmonska kislina (JA) in etilen (ET). Spremljanje prostorsko-časovne dinamike aktivacije genov določene signalne poti in s tem proučevanje rastlinskega odziva na stres nam omogočajo genetsko kodirani biosenzorji. V prvem delu magistrskega dela smo med štirimi nativnimi promotorji genov TGA2_R, TGA2_PW, PR1b_R in PR1b_D iz krompirja izbrali najprimernejšega za uporabo v biosenzorju signalne poti SA. Za ta namen smo promotorska zaporedja sklopili s kodirajočim zaporedjem za luciferazo. Aktivnost promotorjev ob tretiranju s SA, JA in ET smo po prehodni transformaciji tobaka Nicotiana benthamiana preverjali z luciferaznim testom in na podlagi rezultatov izbrali promotor TGA2_R, ki se je izkazal kot najbolj selektiven za SA in s tem najprimernejši za uporabo v biosenzorju. V drugem delu smo optimizirali začetni korak pri metodi za določanje odzivnosti promotorjev v krompirju, to je pripravo protoplastov. Izolirali smo protoplaste krompirja kultivarjev Rywal in Désirée po treh različnih protokolih, izbrali najprimernejšega za nadaljnjo transfekcijo protoplastov in ga optimizirali. Ugotovili smo, da je za izolacijo protoplastov optimalna starost rastlin krompirja pri kultivarju Rywal 3–4 tedne. V naslednjem koraku bomo izbrani promotor uporabili za stabilno transformacijo rastlin krompirja in bomo s tem bližje razumevanju odziva rastlin krompirja na stresorje, kar bo pripomoglo k pripravi odpornejših sort.20212021-09-08 12:40:00Magistrsko delo/naloga129816VisID: 8201COBISS_ID: 81994755sl